Chapitre III
Campagne en mer et analyses

 
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cellules en suspension dans le milieu par filtration. Le matériel cellulaire récolté sur le filtre
subi une extraction par solvant. Les pigments chlorophylliens sont très sensibles à la lumière
et au pH. En milieu acide, la dégradation de la chlorophylle produit de la phéophytine-a
(Rodier, 2009)
Pour nos échantillons, nous avons utilisé la méthode spectrophotométrie de type UV-1800
a. Matériel et réactifs :

 
• Dispositif de filtration
• Filtres en fibre de verre porosité de 0,45 µm (GF/F _ 47 mm)
• Tubes à centrifuge en verre et centrifugeuse
• Spectrophotomètre de type UV-1800 (CHIMQDZU) équipé d’un double faisceau
• Cuves en quartz
• Acétone à 90 %
• Eau déionisée
• Acide chlorhydrique concentré (0.3 mol/l)
• Suspension de carbonate de magnésium (mgCO3).
b.
Méthode :
L’échantillon homogénéisé est filtré puis le filtre est récupéré, plié et placé sur du papier
aluminium. Afin d’assurer une bonne conservation (Fig. III.8.a), on procède à l’ajout de
quelques gouttes de carbonate de magnésium qui prévient la dégradation de la chlorophylle et
on stocke au congélateur.
Pour l’extraction (Fig. III.8.b), les filtres sont récupérés, mis dans des tubes à centrifuge puis
traités avec le solvant (l’acétone 90%) pendant 24h dans un réfrigérateur. L’extraction menée
à son terme, on procède à une centrifugation (Fig. III.8.d) à 4000tr/min.
Cette séparation nous permet d’obtenir un surnageant prêt à la mesure spectrophotométrique
(Fig. III.8.c) aux longueurs d’ondes 665 et 750 nm avant et après acidification par la solution
chlorhydrique.
c.
Expression des résultats :
Le calcul des concentrations en chlorophylle-a et pheopigments-a se fait selon les équations
suivantes (Eq.2 et Eq.3) :
(Chlorophylle a) (ug.l
-1
) = (26.7 (A
na 665 - A
a 665 )*v) / (V*l))……………………… (2)
(Phéopigments) (ug.l
-1
)= (26.7 (1.7 A
a 665 - A
na 665 )*v) / (V*l))………………….. (3)
Avec :
Avant acidification
A
na 665 = (Ab
na 665 - bc 665 ) - (Ab
na 750 - bc 750 )