Chapitre III : MATERIELS ET METHODES
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Figure 12:Spectrofluorimètre à rayonnement ultraviolet HITACHI 650-10
2.1.4.1.2 Etalonnage et préparation des standards
La standardisation de l’appareil nécessite un hydrocarbure de comparaison ou de référence,
il est recommandé aux laboratoires d'utiliser le Chrysène(C 18 H 12 ) comme étalon de référence.
Une solution mère de chrysène est préparée à une concentration de 100μg/ml(COI, 1983).
Les solutions standards sont obtenues par dilution d’un volume prélevé de la solution mère
dans de l’hexane, pour aboutir à une gamme d'étalonnage préparée selon le principe de
neutralisation suivant :
𝑪 𝟏 𝑽 𝟏 = 𝑪 𝟐 𝑽 𝟐
Les concentrations des différents standards ainsi que les volumes à prélever de la solution
mère sont reprises dans le tableau suivant :
Tableau 3: Concentrations des standards d’étalonnage.
Etalon
S1 S2
S3
S4
S5
Concentration (μg/ml)
0.2 0.4
0.6
0.8
1
Volumes (μl)
20 40
60
80
100
Ces étalons sont homogénéisés pendant deux minutes, dans un bac à ultrason.