Chapitre 3 : Matériels et méthodes
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a. Matériel et appareillage
 Dispositif de filtration et des filtres GF/F 0,45μm de porosité ;
 Tubes de dosages de 10ml, et des tubes de 10ml pour la préparation des standards ;
 Centrifugeuse Hettich ZENTRIFUGEN de type EBA 30, avec 12 postes de porteFiltre ;
 Spectrophotomètre fluorescence, modèle TURNER DESIGNR 10-AU ;
 Matériels courant de laboratoire.
b. Réactifs
* Suspension carbonate de magnésium MgCO3 à 1 % ;
* Solvant d'extraction : acétone à 90% ;
* Solution d'acide chloridrique 0,5N.
c. Mode opératoire
1- Analyse au laboratoire
L’analyse de la chlorophylle nécessite une protection permanente contre la lumière à toutes
les étapes du protocole analytique, car ces pigments sont photosensibles.
2- Filtration et conservation à bord du navire
o Après la filtration on ajoute quelques gouttes de MgCO3 sur le filtre ;
o Le filtre est plié en quatre et enrobé dans un papier aluminium préalablement
étiqueté ;
o Mettre les filtres dans le congélateur pour une analyse ultérieure.
3- Extraction des pigments
 L’extraction se fait par l’addition de 10 ml d’acétone à 90% (90/10 acétone/eau).
 On mesure l’absorbance dans une cuve de 1 cm de trajet optique à l’aide d’un
spectrophotomètre de marque CECIL type CE 1021 Séries 10000, à une longueur
d’onde de 665 nm et cela dans un premier temps sans acidification, puis en deuxième
lieu avec acidification (acide chlorhydrique à 0,3mol/l soit 25 ml d’HCL pour 1000 ml
d’eau distillée) pour obtenir la mesure des phéopigments.
 Deux autres mesures d’absorbance ont été réalisées, l’une est celle du blanc de cuve
qui a été obtenue par la mesure de l’absorbance de la paroi de la cuve avec de l’eau
distillée et la seconde mesure est celle est celle du blanc de filtre (acétone à 90%) avec
filtre avant et après acidification.
d. Les calculs
[Chlorophylle -a] (μg/l) = 27,7. (A665na-A665a). v/V.L
Avec : V : volume d’eau filtré en (litre).
v : volume d’acétone en (millilitre).
L : longueur du chemin optique de la cuve de mesure, (1cm).