MATÉRIELS ET MÉTHODES
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3.6.7 Chlorophylle a
La mesure de la chlorophylle a est un indicateur de la biomasse phytoplanctonique du milieu
marin. Ce pigment est présent chez tous les organismes photosynthétiques aérobies ; il est
sensible à la lumière et peut être dégradé en présence d’acide (Oriol, et al., 2015)
3.6.7.1 Principe de la méthode
La méthode fluorimétrique utilise la propriété qu’ont les pigments chlorophylliens d’émettre
une fluorescence rouge lorsqu’ils sont excités par de la lumière bleue ou ultra-violette. Le
fluorimètre doit donc être équipé d'une lampe émettant dans le bleu, d’un filtre d’excitation bleu
(420- 450nm) et d’un filtre d’émission rouge (> 665nm). La méthode est basée sur la mesure
de fluorescence de l’échantillon avant et après acidification. (Oriol, et al., 2015)
3.6.7.2 Echantillonnage
L’échantillonnage de la chlorophylle-a a été fait en dernier, dans des bouteilles en plastique
bien enveloppées dans des sachets noires, pour éviter tout contact avec la lumière
Les échantillons d’eau de mer sont conservés au frais et à l’abri de la lumière (dans une
glacière munie de pains de glace).
3.6.7.3 Analyse au laboratoire
3.6.7.3.1 Filtration des échantillons
Nos échantillons de 1.5l sont filtrés le jour même de la sortie, sur des filtre Whatman GF/F de
47mm de diamètre en utilisant une rampe de filtration reliée à une pompe à vide munie d’un
manomètre.
Juste avant que le filtre ne vienne à sec, arrêter le vide (pour éviter l’éclatement des cellules).
Plier le filtre à l’aide des pinces, face chargée à l’intérieur. Eviter tout contact des pinces et des
particules présentes sur le filtre
3.6.7.3.2 Extraction de la chlorophylle-a
• Placer, à l’aide de la pince à bouts plats, les filtres dans les tubes à centrifuger en
verre ;
• Ajouter 5ml d’acétone 90% à l’aide d’une micropipette ;
• Broyer le filtre à l’aide d’une baguette de verre à brisure nette ;
• Compléter le volume d’extraction (10 ml) avec 5ml d’acétone 90% ;