Chapitre II : Matériel et méthodes 2018
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a- Coloration de Gram
La coloration de Gram doit son nom au bactériologiste danois Hans Christian Gram qui mis au point le
protocole en 1884.C’est une méthode de coloration différentielle sur un frottis fixé a la chaleur.
Dans un premier temps colorer pendant une minute avec le colorant violet de gentiane ;
le frottis coloré est rincé rapidement avec une solution iodo-ioduré de Lugol, et il y est maintenu
pendant une minute ;
Le frottis est ensuite décoloré avec l’alcool à 95 % pendant quelques secondes (45 secondes) jusqu'à
élimination de l’excès du colorant puis rincé immédiatement avec l’eau de robinet ;
Le frottis est ensuite traité avec un colorant qui est la solution de Fushine ;
rincé rapidement et séché.
Après ce traitement, les cellules Gram négatif apparaissent roses et les cellules Gram positif apparaissent
sous une couleur violette (Singleton et Sainsbury, 1984).
b- Test catalase
La catalase est une enzyme présente chez la plupart des bactéries aérobies strictes et anaérobie facultatives.
(Camille, 2008).
Elle décompose l’eau oxygénée en eau et en oxygène qui se dégage lorsqu’il y a présence de la catalase,
comme suit :
c- Test oxydase
L’oxydase ou Cytochrome oxydase est une enzyme présente dans certaines chaines respiratoires
cytochromiques bactériennes. La recherche de cette enzyme est utile dans le diagnostique des bactéries à
Gram négatif. (Camille, 2008).
Ce test est réalisé a l’aide des disques oxydase ; écraser a l’aide d’une anse de Platine une colonie de germe à
étudier et au bout de quelques seconde s’il ya apparition de coloration violette on dit que la bactérie est a
oxydase positif et qu’elle possède la cytochrome oxydase.
d- Test biochimique «Galeries API »
La galerie API est composée de 20 microtubes permettant de réaliser 20 tests biochimiques différents afin
d’identifier le germe recherché. Différentes galeries API ont été utilisées pour l’identification des différents
germes à titre d’exemple : API 20 STREP pour les streptocoques, API20 STAPH pour les staphylocoques,
2H2O2
2H2O + O2
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a- Coloration de Gram
La coloration de Gram doit son nom au bactériologiste danois Hans Christian Gram qui mis au point le
protocole en 1884.C’est une méthode de coloration différentielle sur un frottis fixé a la chaleur.
Dans un premier temps colorer pendant une minute avec le colorant violet de gentiane ;
le frottis coloré est rincé rapidement avec une solution iodo-ioduré de Lugol, et il y est maintenu
pendant une minute ;
Le frottis est ensuite décoloré avec l’alcool à 95 % pendant quelques secondes (45 secondes) jusqu'à
élimination de l’excès du colorant puis rincé immédiatement avec l’eau de robinet ;
Le frottis est ensuite traité avec un colorant qui est la solution de Fushine ;
rincé rapidement et séché.
Après ce traitement, les cellules Gram négatif apparaissent roses et les cellules Gram positif apparaissent
sous une couleur violette (Singleton et Sainsbury, 1984).
b- Test catalase
La catalase est une enzyme présente chez la plupart des bactéries aérobies strictes et anaérobie facultatives.
(Camille, 2008).
Elle décompose l’eau oxygénée en eau et en oxygène qui se dégage lorsqu’il y a présence de la catalase,
comme suit :
c- Test oxydase
L’oxydase ou Cytochrome oxydase est une enzyme présente dans certaines chaines respiratoires
cytochromiques bactériennes. La recherche de cette enzyme est utile dans le diagnostique des bactéries à
Gram négatif. (Camille, 2008).
Ce test est réalisé a l’aide des disques oxydase ; écraser a l’aide d’une anse de Platine une colonie de germe à
étudier et au bout de quelques seconde s’il ya apparition de coloration violette on dit que la bactérie est a
oxydase positif et qu’elle possède la cytochrome oxydase.
d- Test biochimique «Galeries API »
La galerie API est composée de 20 microtubes permettant de réaliser 20 tests biochimiques différents afin
d’identifier le germe recherché. Différentes galeries API ont été utilisées pour l’identification des différents
germes à titre d’exemple : API 20 STREP pour les streptocoques, API20 STAPH pour les staphylocoques,
2H2O2
2H2O + O2