ІІ. Matériel et méthodes
24
ІІ.4.2.L’analyse microbiologique du sédiment
ІІ.4.2.1.Dénombrement des coliformes totaux, thermotolérants et E.coli par la méthode
du nombre le plus probable (NPP)
Conformément à la norme NF T90-413, la numération des coliformes par la méthode des NPP
est basée sur la propriété commune des coliformes pour fermenter le lactose tout en produisant
du gaz dans une période de 24-48h, dans des tubes munis de cloches de Durham. La présence
des germes recherchés se traduit par : un trouble dans toute la masse liquide, un dégagement de
gaz dans les cloches et virage de couleur s’il y a présence d’indicateur de pH.
ІІ.4.2.1.1.Dénombrement des coliformes totaux par la méthode des NPP
On prépare 3 séries de 3 tubes, chacun contenant 9 ml de bouillon lactosé bilié au vert brillant
(BVBL) munis de cloche de Durham. Chacun des 3 tubes de la première série reçoit 1 ml de la
dilution 10
-1 (Solution mère). Les tubes de la deuxième et troisième série reçoivent
respectivement 1 ml de la dilution 10
−2 et 1 ml de la dilution 10
−3
. L’ensemble des tubes
ainsi préparé est incubé à 37°C pendant 24 à 48 heures (figure 15).
Le nombre caractéristique formé à partir des tubes de BVBL (trouble + gaz) sera lu dans la
table NPP. Annexe2
ІІ.4.2.1.2.Dénombrement des Coliformes thermotolérants et E.coli
Les tubes de BVBL positifs (trouble + gaz) à 37°C seront soumis au test de Mackenzie pour le
dénombrement des coliformes thermotolérants et E.coli :
A partir de chaque tube BVBL+ à 37°C, un tube de BVBL et un tube d’EPE (Eau Peptonée
Exempte d’indole) seront ensemencés. Après une incubation de 24 à 48h à 44°C (Figure 16),
la lecture sera comme suit :
- Apparition de trouble et gaz dans le BVBL indique la présence de coliformes
thermotolérants.
- Apparition d’anneau rouge après l’ajout du réactif de Kovacs indique la présence
d’E.coli.
- Un nombre caractéristique est déterminé pour chaque cas. L’établissement du nombre
le plus probable a été effectué par la consultation de la table NPP(Annexe2)
- Les résultats sont exprimés en NPP dans 1 g de sédiment.
24
ІІ.4.2.L’analyse microbiologique du sédiment
ІІ.4.2.1.Dénombrement des coliformes totaux, thermotolérants et E.coli par la méthode
du nombre le plus probable (NPP)
Conformément à la norme NF T90-413, la numération des coliformes par la méthode des NPP
est basée sur la propriété commune des coliformes pour fermenter le lactose tout en produisant
du gaz dans une période de 24-48h, dans des tubes munis de cloches de Durham. La présence
des germes recherchés se traduit par : un trouble dans toute la masse liquide, un dégagement de
gaz dans les cloches et virage de couleur s’il y a présence d’indicateur de pH.
ІІ.4.2.1.1.Dénombrement des coliformes totaux par la méthode des NPP
On prépare 3 séries de 3 tubes, chacun contenant 9 ml de bouillon lactosé bilié au vert brillant
(BVBL) munis de cloche de Durham. Chacun des 3 tubes de la première série reçoit 1 ml de la
dilution 10
-1 (Solution mère). Les tubes de la deuxième et troisième série reçoivent
respectivement 1 ml de la dilution 10
−2 et 1 ml de la dilution 10
−3
. L’ensemble des tubes
ainsi préparé est incubé à 37°C pendant 24 à 48 heures (figure 15).
Le nombre caractéristique formé à partir des tubes de BVBL (trouble + gaz) sera lu dans la
table NPP. Annexe2
ІІ.4.2.1.2.Dénombrement des Coliformes thermotolérants et E.coli
Les tubes de BVBL positifs (trouble + gaz) à 37°C seront soumis au test de Mackenzie pour le
dénombrement des coliformes thermotolérants et E.coli :
A partir de chaque tube BVBL+ à 37°C, un tube de BVBL et un tube d’EPE (Eau Peptonée
Exempte d’indole) seront ensemencés. Après une incubation de 24 à 48h à 44°C (Figure 16),
la lecture sera comme suit :
- Apparition de trouble et gaz dans le BVBL indique la présence de coliformes
thermotolérants.
- Apparition d’anneau rouge après l’ajout du réactif de Kovacs indique la présence
d’E.coli.
- Un nombre caractéristique est déterminé pour chaque cas. L’établissement du nombre
le plus probable a été effectué par la consultation de la table NPP(Annexe2)
- Les résultats sont exprimés en NPP dans 1 g de sédiment.