RESULTATS
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VII. Résultats du transfert génétique par conjugaison
Des essais de transfert génétique par conjugaison en milieu solide ont été réalisés sur les
souches ayant montré une image de synergie, c'est-à-dire sur les souches de
Stenotrophomonas maltophilia (I9 et I10), Burkholderia cepacia (I12) et E. coli (CE10). Deux
souches multirésistantes : une Shigella spp (CZ7) et une Bordetella spp. (CE26) ont aussi fait
objet d’un transfert génétique par conjugaison vers deux souches réceptrices (E.coli K-12
BM21 NA
R et E.coli K12 J53 RA
R ).
Le transfert n’a été positif que pour E.coli. Après 20 heures de contact entre les souches
parentales, trois transconjugants d’E. coli (Tc1, Tc2 et Tc3) ont été sélectionnés sur boite MH
contenant CTX (4μg/ml) et NA (50μg/ml). Ces transconjugants, analysés par antibiogramme,
ont été positifs pour le test de synergie, ce qui confirme le transfert du phénotype BLSE. Le
tableau XIII comprend les profils de résistance de la souche donatrice (E. coli) et de ses
transconjugants.
Tableau XIII : Les profils de résistance chez E. coli et ses transconjugants.
Phénotype de résistance
Souche sauvage (E. coli) AMX-TIC-CRO-CTX –AMC-MZ-MEC-CF-SSS-TMP-SXT-C
Transconjugants
Tc1 AMX-TIC-CRO-CTX-MZ-MEC-CF-NA
Tc2 AMX-TIC-CRO-CTX-MZ-MEC-CF-NA
Tc3 AMX-TIC-CRO-CTX-MZ-MEC-CF-NA
Le phénotype BLSE présenté par E.coli est donc porté par un plasmide transférable.
Concernant les céphalosporines de 3
ème génération, une hydrolyse préférentielle du céfotaxime
et une sensibilité à la ceftazidime ont été observées. Il est à noter l’absence de co-transfert de
la résistance à la céfoxitine avec celle aux céphalosporines de 3
ème génération, de même pour
les molécules non béta-lactames : aminosides et sulfamides.
VIII. Résultats de la recherche des gènes BLSE(s) par PCR
Les souches ayant présenté des images de synergie ont été analysées par PCR pour la
recherche de la présence d’un ou des gènes codant une ou des BLSE(s), en utilisant des
amorces bla TEM et bla CTX-M spécifiques de famille, ainsi que les amorces spécifiques des 5
groupes de CTX-M.
L’examen des profils d’amplification après électrophorèse sur gel d’agarose a permis de noter
la présence du gène bla CTX-M du groupe 1 chez E. coli seulement et ses transconjugants
(Fig.28 et 29). Le gène TEM n’a pas été détecté.
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VII. Résultats du transfert génétique par conjugaison
Des essais de transfert génétique par conjugaison en milieu solide ont été réalisés sur les
souches ayant montré une image de synergie, c'est-à-dire sur les souches de
Stenotrophomonas maltophilia (I9 et I10), Burkholderia cepacia (I12) et E. coli (CE10). Deux
souches multirésistantes : une Shigella spp (CZ7) et une Bordetella spp. (CE26) ont aussi fait
objet d’un transfert génétique par conjugaison vers deux souches réceptrices (E.coli K-12
BM21 NA
R et E.coli K12 J53 RA
R ).
Le transfert n’a été positif que pour E.coli. Après 20 heures de contact entre les souches
parentales, trois transconjugants d’E. coli (Tc1, Tc2 et Tc3) ont été sélectionnés sur boite MH
contenant CTX (4μg/ml) et NA (50μg/ml). Ces transconjugants, analysés par antibiogramme,
ont été positifs pour le test de synergie, ce qui confirme le transfert du phénotype BLSE. Le
tableau XIII comprend les profils de résistance de la souche donatrice (E. coli) et de ses
transconjugants.
Tableau XIII : Les profils de résistance chez E. coli et ses transconjugants.
Phénotype de résistance
Souche sauvage (E. coli) AMX-TIC-CRO-CTX –AMC-MZ-MEC-CF-SSS-TMP-SXT-C
Transconjugants
Tc1 AMX-TIC-CRO-CTX-MZ-MEC-CF-NA
Tc2 AMX-TIC-CRO-CTX-MZ-MEC-CF-NA
Tc3 AMX-TIC-CRO-CTX-MZ-MEC-CF-NA
Le phénotype BLSE présenté par E.coli est donc porté par un plasmide transférable.
Concernant les céphalosporines de 3
ème génération, une hydrolyse préférentielle du céfotaxime
et une sensibilité à la ceftazidime ont été observées. Il est à noter l’absence de co-transfert de
la résistance à la céfoxitine avec celle aux céphalosporines de 3
ème génération, de même pour
les molécules non béta-lactames : aminosides et sulfamides.
VIII. Résultats de la recherche des gènes BLSE(s) par PCR
Les souches ayant présenté des images de synergie ont été analysées par PCR pour la
recherche de la présence d’un ou des gènes codant une ou des BLSE(s), en utilisant des
amorces bla TEM et bla CTX-M spécifiques de famille, ainsi que les amorces spécifiques des 5
groupes de CTX-M.
L’examen des profils d’amplification après électrophorèse sur gel d’agarose a permis de noter
la présence du gène bla CTX-M du groupe 1 chez E. coli seulement et ses transconjugants
(Fig.28 et 29). Le gène TEM n’a pas été détecté.