Chapitre II
Matériels et méthodes
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5.4. Les techniques de caractérisation des germes recherchées
Afin de mieux caractériser le profil biochimique et morphologique des bactéries recherchées,
qui appartiennent aux groupes des coliformes, des staphylocoques et des salmonelles ;
Une séries de tests a été effectuée de :
5.4.1. Coloration de Gram
Elle est reliée principalement à la différence de structure chimique des parois cellulaire des
bactéries (DELLARAS et BERNARD., 2003).
Le protocole de la coloration de gram selon Dellarras(2007) est le suivant :
Préparer un frottis d’une culture bactérienne pure
Recouvrir le frottis de violet de gentiane ; laisser agir nue minute ; rincer à l’eau distillée
Verser du Lugol et le laisser agir pendant une minute, rincer à l’eau distillée.
Décolorer à l’alcool à 95%, entre15 et 30 secondes ; rincer à l’eau distillée.
Recolorer avec la Fushine pendant 10 à30 secondes ; rincer à l’eau distillée.
Sécher au –dessus de la flamme d’un bec benzène.
Avec cette coloration double, les bactéries Gram positif apparaissent en violet foncé tandis
que les bactéries Gram négatif sont colorées en rose ou en rouge.
5.4.2. Test de catalase
La catalase est une enzyme présente chez la pluparts des bactéries aérobies strictes et
anaérobies facultatives. Elle permet de détruire des peroxydes formés au cours de réaction de
l’oxydation (DELLARAS et BERNARD., 2003).
L’eau oxygénée formée est décomposée en présence de cette enzyme, en eau et en oxygène
qui se dégage suivant la réaction.
2 H 2 O 2
2H 2 O +O 2