Chapitre 2
Moyens et Méthodes d’analyses
27
Pi: poids incinéré ;
Ps: poids sec.
2.4.6. Dosage de la chlorophylle a par fluorométrie
La méthode de dosage par fluorométrie a été élaborée à l’origine par Yentsch et Menzel
(1963) et a été décrite par Holm-Hansen et al. (1965) et par Strickland et Parsons
(1972). Elle a été élaborée pour une application en milieu marin. Elle présente l’avantage
d’être très sensible et ne nécessite qu’un faible volume d’échantillon. Elle est préférée à la
méthode spectrophotométrique, laquelle manque de sensibilité.
Principe de la méthode de dosage
L’échantillon d’eau de mer prélevé (250 ml) est filtré et les algues sont recueillies sur un
filtre (GF/F), de porosité d’environ 0,45μm et de diamètre 25 mm. Le filtre sera ensuite
immergé dans 7ml de solvant (méthanol à 97%) qui assurera l’extraction des pigments
chlorophylliens dans des tubes que l’on met à l’obscurité et que l’on place dans une
centrifugeuse afin d’homogénéise le tout, puis à la température de 5°C dans le
réfrigérateur, pour une période d’extraction de 30 minutes. La concentration de
chlorophylle a est déterminée en mesurant la fluorescence émise à une longueur d’onde >
665 nm, à la suite d’une excitation à une longueur d’onde 450 nm.
La méthode apporte une correction pour la présence de phéophytine a, laquelle absorbe à
une longueur d’onde voisine de la chlorophylle a. La mesure fluorométrique est effectuée
avant acidification (mesure de la chlorophylle a) et après une acidification qui transforme
toute la chlorophylle a en phéophytine a, laquelle émet de la fluorescence avec moins
d’intensité.
Le matériel utilisé, les réactifs et les étalons pour le dosage de la chlorophylle a sont
consignés en annexe 5.
Les résultats fournis ne concernent donc que la chlorophylle a calculée d'après la formule
suivante qui néglige la présence des phaeopigments:
%MO = (Ps-Pi/Ps) * 100
Moyens et Méthodes d’analyses
27
Pi: poids incinéré ;
Ps: poids sec.
2.4.6. Dosage de la chlorophylle a par fluorométrie
La méthode de dosage par fluorométrie a été élaborée à l’origine par Yentsch et Menzel
(1963) et a été décrite par Holm-Hansen et al. (1965) et par Strickland et Parsons
(1972). Elle a été élaborée pour une application en milieu marin. Elle présente l’avantage
d’être très sensible et ne nécessite qu’un faible volume d’échantillon. Elle est préférée à la
méthode spectrophotométrique, laquelle manque de sensibilité.
Principe de la méthode de dosage
L’échantillon d’eau de mer prélevé (250 ml) est filtré et les algues sont recueillies sur un
filtre (GF/F), de porosité d’environ 0,45μm et de diamètre 25 mm. Le filtre sera ensuite
immergé dans 7ml de solvant (méthanol à 97%) qui assurera l’extraction des pigments
chlorophylliens dans des tubes que l’on met à l’obscurité et que l’on place dans une
centrifugeuse afin d’homogénéise le tout, puis à la température de 5°C dans le
réfrigérateur, pour une période d’extraction de 30 minutes. La concentration de
chlorophylle a est déterminée en mesurant la fluorescence émise à une longueur d’onde >
665 nm, à la suite d’une excitation à une longueur d’onde 450 nm.
La méthode apporte une correction pour la présence de phéophytine a, laquelle absorbe à
une longueur d’onde voisine de la chlorophylle a. La mesure fluorométrique est effectuée
avant acidification (mesure de la chlorophylle a) et après une acidification qui transforme
toute la chlorophylle a en phéophytine a, laquelle émet de la fluorescence avec moins
d’intensité.
Le matériel utilisé, les réactifs et les étalons pour le dosage de la chlorophylle a sont
consignés en annexe 5.
Les résultats fournis ne concernent donc que la chlorophylle a calculée d'après la formule
suivante qui néglige la présence des phaeopigments:
%MO = (Ps-Pi/Ps) * 100