Chapitre 3
Matériel et Méthodes
37
V.1.3. Matériel utilisé
Auto-analyzer SAN plus System de marque SKALAR®, 1998;
Bi-distillateur MILLI-Q® Reagent Water System ;
Des micropipettes Fortuna ® avec éjecteur d’embout de type DIGITAL , une de 200 à
1000 μl et l’autre de 20 à 250 μl, ainsi que des fioles de 100 et 500 ml ;
Balance, Spatule, entonnoir, bécher et une hôte.
Seringue et filtres millipores membranes.
V.2. Dosage chimique des sels nutritifs
1- Principe général
Le principe de dosage des sels nutritifs est basé sur une réaction de coloration. En effet ces
sels réagissent dans certaines conditions (T°C, pH, Catalyseur …) avec des réactifs
spécifiques pour donner naissance à une coloration absorbant la lumière à une certaine
longueur d’ondes (λ). L’absorption de l’énergie lumineuse dépend de l’intensité de la
coloration qui est plus importante lorsque la solution est concentrée en sel dosé.
2- Etalonnage
Cette opération nécessite la préparation pour chacun des éléments à analyser une solution
mère et une solution fille. Pour chacune de ces solutions filles, on réalise une série de six
étalons couvrant la gamme de la concentration des échantillons rencontrée habituellement
dans l’eau de mer (Tableau 3.2, annexe 3). Les droites d’étalonnage sont établies
automatiquement par le logiciel en utilisant les concentrations connus des solutions étalons et
leurs hauteurs de pic correspondantes. L’eau bi-distillée et les réactifs sont pris comme
référence pour la construction de ligne de base.
V.2. 1. Principe de dosage de l’Azote ammoniacal (NH 4
+ )
Le constructeur SKALAR a adapté la procédure automatisé pour la détermination de
l’ammonium pour l’analyse de l’eau de mer, qui est basé sur la réaction de Berthelot (1859)
modifiée par Thé. Elle s'applique à des concentrations allant de 2 à 100 ppb N.
En milieu alcalin (8 < pH < 11,5), l'ammonium dissous réagit sur l’hypochlorite pour former
une monochloramine. Ce composé, en présence de phénol et d’un excès d’hypochlorite
(milieu oxydant) donne lien à la formation d’un bleu indophénol. Après oxydation un
composé coloré vert est formé. La réaction de Thé est catalysée par le nitroprusside de
sodium. Le composé formé dans un maximum d’absorption qui se fait à une longueur d’onde
de 630 nm (SKALAR® 1998).
a) Les réactifs et les standards
Pour la préparation des réactifs et des standards c’est faite selon le protocole du producteur
SKALAR ®, 1998 (Partie I, annexe 5).
Matériel et Méthodes
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V.1.3. Matériel utilisé
Auto-analyzer SAN plus System de marque SKALAR®, 1998;
Bi-distillateur MILLI-Q® Reagent Water System ;
Des micropipettes Fortuna ® avec éjecteur d’embout de type DIGITAL , une de 200 à
1000 μl et l’autre de 20 à 250 μl, ainsi que des fioles de 100 et 500 ml ;
Balance, Spatule, entonnoir, bécher et une hôte.
Seringue et filtres millipores membranes.
V.2. Dosage chimique des sels nutritifs
1- Principe général
Le principe de dosage des sels nutritifs est basé sur une réaction de coloration. En effet ces
sels réagissent dans certaines conditions (T°C, pH, Catalyseur …) avec des réactifs
spécifiques pour donner naissance à une coloration absorbant la lumière à une certaine
longueur d’ondes (λ). L’absorption de l’énergie lumineuse dépend de l’intensité de la
coloration qui est plus importante lorsque la solution est concentrée en sel dosé.
2- Etalonnage
Cette opération nécessite la préparation pour chacun des éléments à analyser une solution
mère et une solution fille. Pour chacune de ces solutions filles, on réalise une série de six
étalons couvrant la gamme de la concentration des échantillons rencontrée habituellement
dans l’eau de mer (Tableau 3.2, annexe 3). Les droites d’étalonnage sont établies
automatiquement par le logiciel en utilisant les concentrations connus des solutions étalons et
leurs hauteurs de pic correspondantes. L’eau bi-distillée et les réactifs sont pris comme
référence pour la construction de ligne de base.
V.2. 1. Principe de dosage de l’Azote ammoniacal (NH 4
+ )
Le constructeur SKALAR a adapté la procédure automatisé pour la détermination de
l’ammonium pour l’analyse de l’eau de mer, qui est basé sur la réaction de Berthelot (1859)
modifiée par Thé. Elle s'applique à des concentrations allant de 2 à 100 ppb N.
En milieu alcalin (8 < pH < 11,5), l'ammonium dissous réagit sur l’hypochlorite pour former
une monochloramine. Ce composé, en présence de phénol et d’un excès d’hypochlorite
(milieu oxydant) donne lien à la formation d’un bleu indophénol. Après oxydation un
composé coloré vert est formé. La réaction de Thé est catalysée par le nitroprusside de
sodium. Le composé formé dans un maximum d’absorption qui se fait à une longueur d’onde
de 630 nm (SKALAR® 1998).
a) Les réactifs et les standards
Pour la préparation des réactifs et des standards c’est faite selon le protocole du producteur
SKALAR ®, 1998 (Partie I, annexe 5).