Chapitre I :
Matériel et méthodes
9
3.5-La chlorophylle a et les phéopigments a :
a-La loi d’absorbance
La mesure de l’intensité de l’absorption dépend directement du nombre des particules absorbant la lumière selon la loi de Beer Lambert selon laquelle l’absorbance est proportionnelle ou
coefficient d’absorption spécifique ε ou trajet optique L et a la concentration C.
• I : l’intensité après absorption par les atomes.
• I 0 : l’intensité initiale de la source lumineuse
b-Protocole :
La quantité de chlorophylle a est mesurée par la méthode spectrophotometrique monochromatique de LORENZEN., selon AMINOT et KEROUEL. , 2004).
La filtration est réalisée sur un filtre de Wattman GF/F DE 0.45 micromètre, et la dépression est créée par une pompe de marque KMF NEUBE REGER Type N022.AN.18.
L’extraction se fait par addition de 10 ml d’acétone à 90/ (90/10 acétone /eau).Après passage
des filtres dans un bac à ultra-son (VWR LUSL 300 TH) et cela pendant 5 minutes à 30°C, on
mesure l’absorbance dans une cuve de 1 cm de trajet optique à l’aide d’un spectrophotomètre
de marque CECIL type CE1021 Séries 10000, à une longueur d’onde de 665nm et cela dans
un premier temps sans acidification , puis en deuxième lieu avec acidification (Acide chlorhydrique à 0.3mol/l) pour obtenir la mesure des phéopigments a.
Deux autres meures d’absorbance ont été réalisées .L’une est celle du blanc de cuve qui a été
obtenu par la mesure de l’absorbance de la loi de la cuve avec de l’eau distillée et la seconde
mesure est celle du blanc de filtre (acétone à 90/) avec filtre avant et après acidification.
-De l’étape de filtration jusqu’au passage au spectrophotomètre, les tubes à essai ont toujours
été gardés à l’obscurité.
Calcul et expression des résultats :
Chlorophylle a (mg/m
3 ) = 27,7* (A665
na – A665
a )* v/ V.I
Matériel et méthodes
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3.5-La chlorophylle a et les phéopigments a :
a-La loi d’absorbance
La mesure de l’intensité de l’absorption dépend directement du nombre des particules absorbant la lumière selon la loi de Beer Lambert selon laquelle l’absorbance est proportionnelle ou
coefficient d’absorption spécifique ε ou trajet optique L et a la concentration C.
• I : l’intensité après absorption par les atomes.
• I 0 : l’intensité initiale de la source lumineuse
b-Protocole :
La quantité de chlorophylle a est mesurée par la méthode spectrophotometrique monochromatique de LORENZEN., selon AMINOT et KEROUEL. , 2004).
La filtration est réalisée sur un filtre de Wattman GF/F DE 0.45 micromètre, et la dépression est créée par une pompe de marque KMF NEUBE REGER Type N022.AN.18.
L’extraction se fait par addition de 10 ml d’acétone à 90/ (90/10 acétone /eau).Après passage
des filtres dans un bac à ultra-son (VWR LUSL 300 TH) et cela pendant 5 minutes à 30°C, on
mesure l’absorbance dans une cuve de 1 cm de trajet optique à l’aide d’un spectrophotomètre
de marque CECIL type CE1021 Séries 10000, à une longueur d’onde de 665nm et cela dans
un premier temps sans acidification , puis en deuxième lieu avec acidification (Acide chlorhydrique à 0.3mol/l) pour obtenir la mesure des phéopigments a.
Deux autres meures d’absorbance ont été réalisées .L’une est celle du blanc de cuve qui a été
obtenu par la mesure de l’absorbance de la loi de la cuve avec de l’eau distillée et la seconde
mesure est celle du blanc de filtre (acétone à 90/) avec filtre avant et après acidification.
-De l’étape de filtration jusqu’au passage au spectrophotomètre, les tubes à essai ont toujours
été gardés à l’obscurité.
Calcul et expression des résultats :
Chlorophylle a (mg/m
3 ) = 27,7* (A665
na – A665
a )* v/ V.I