Chapitre 3 : Matériels et méthodes
52
d) Mode opératoire
- Introduire, dans une éprouvette en polyéthylène de 50 ml, 10 ml du réactif 1.
- Ajouter à la pipette 25 ml d’échantillon, boucher et mélanger.
- Attendre au minimum 10 min mais jamais plus de 30 min, et noter ce temps à ½ min près afin
d’opérer toujours de façon identique pour tous les échantillons et les étalons.
- Ajouter rapidement le réactif 2, fraichement préparé, pour à 50 ml et mélanger aussitôt.
- Attendre 2 à 3 heures et mesurer l’absorbance Atr en cuve de 1 cm par rapport à l’eau
distillée, a 810 nm.
2.4.5. Dosage de l’azote ammoniacal N-NH 4
+
a) Principe de la méthode
La méthode décrite mesure la totalité de l’azote ammoniacal, soit N-NH 3 + N-NH 4
+ .
Il s’agit de la méthode Koroleff (1969). Dans un premier temps, l’ammoniac forme une
monochloramine avec l’hypochlorite en milieu légèrement basique. Cette dernière réagit avec
le phénol en présence d’un excès d’hypochlorite pour former le bleu d’indo-phénol absorbe à
630 nm.
b) Les réactifs exigés
- Réactifs 1 : solution de phénol-nitroprussiate.
- Réactifs 2 : solution alcaline d’hypochlorite.
- Solution étalon primaire d’ammonium.
- Solution étalon secondaire d’ammonium.
c) Etalonnage
- Introduire dans des fioles jaugées de 100 ml, 0.5 ml -1 ml -1.5 ml -2 ml -2.5 ml -5 ml de la
solution étalon secondaire et compléter a 100 ml avec l’eau distillée pour obtenir les
concentrations présentées respectivement comme suit : 0,5 μmole/l -1 μmole/l - 1,5 μmole/l -2
μmole/l -2,5 μmole/l -5μmole/l.
- Analyser ces solutions selon le mode opératoire de l’azote ammoniacal.
- Après avoir les absorbances, tracer la courbe d’étalonnage.
La courbe d'étalonnage établit (Figure 3.14) a pour équation y = 0,1899x avec R² = 0.9999.
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d) Mode opératoire
- Introduire, dans une éprouvette en polyéthylène de 50 ml, 10 ml du réactif 1.
- Ajouter à la pipette 25 ml d’échantillon, boucher et mélanger.
- Attendre au minimum 10 min mais jamais plus de 30 min, et noter ce temps à ½ min près afin
d’opérer toujours de façon identique pour tous les échantillons et les étalons.
- Ajouter rapidement le réactif 2, fraichement préparé, pour à 50 ml et mélanger aussitôt.
- Attendre 2 à 3 heures et mesurer l’absorbance Atr en cuve de 1 cm par rapport à l’eau
distillée, a 810 nm.
2.4.5. Dosage de l’azote ammoniacal N-NH 4
+
a) Principe de la méthode
La méthode décrite mesure la totalité de l’azote ammoniacal, soit N-NH 3 + N-NH 4
+ .
Il s’agit de la méthode Koroleff (1969). Dans un premier temps, l’ammoniac forme une
monochloramine avec l’hypochlorite en milieu légèrement basique. Cette dernière réagit avec
le phénol en présence d’un excès d’hypochlorite pour former le bleu d’indo-phénol absorbe à
630 nm.
b) Les réactifs exigés
- Réactifs 1 : solution de phénol-nitroprussiate.
- Réactifs 2 : solution alcaline d’hypochlorite.
- Solution étalon primaire d’ammonium.
- Solution étalon secondaire d’ammonium.
c) Etalonnage
- Introduire dans des fioles jaugées de 100 ml, 0.5 ml -1 ml -1.5 ml -2 ml -2.5 ml -5 ml de la
solution étalon secondaire et compléter a 100 ml avec l’eau distillée pour obtenir les
concentrations présentées respectivement comme suit : 0,5 μmole/l -1 μmole/l - 1,5 μmole/l -2
μmole/l -2,5 μmole/l -5μmole/l.
- Analyser ces solutions selon le mode opératoire de l’azote ammoniacal.
- Après avoir les absorbances, tracer la courbe d’étalonnage.
La courbe d'étalonnage établit (Figure 3.14) a pour équation y = 0,1899x avec R² = 0.9999.