Chapitre 3 : Matériel et méthodes
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2.7.2 Principe de dosage des sels nutritifs
La méthode utilisée pour le dosage des sels nutritifs (nitrites, nitrates et phosphates) est
basée sur une réaction de coloration. En effet, ces sels réagissent dans certaines conditions
(température, pH, présence de catalyseurs,…) avec des réactifs spécifiques pour donner une
coloration absorbant de la lumière à certaine longueur d’onde (λ). L’absorption de l’énergie
lumineuse dépend de l’intensité de la coloration, de même, ce dernier est d’autant plus
important que la solution est concentrée en sel dosé. La quantité de lumière absorbée par la
solution, appelée absorbance (A) ou densité optique (D.O), obéit à la loi de Beer-Lambert qui
est exprimée par la relation suivante :
A = D. O = Log( ) = ε. L. C ……………………………………………………..(6)
I0 et I : sont respectivement intensité lumineuse incidente et émergente du milieu absorbant.
: Le coefficient d’extinction molaire variant en fonction de la température et la longueur
d’onde.
L : La longueur du milieu traversé exprimé en cm.
C : Concentration de la solution absorbante exprimée en mole/l.
A : Absorbance de la solution.
D.O : Densité optique de la solution.
2.7.3 Dosage des nitrites
Les nitrites (N02
-
) forment un diazoïque par action avec la sulfanilamide en milieu acide
pH<2. Ce composé formera ensuite en présence de N-naphtylethylénediamine un composé
azoïque de couleur rose absorbant la lumière à 540 nm (Benschneider, et al., 1952).
2.7.4 Dosage des nitrates
La méthode est basée sur la réduction des nitrates (N03
-
) en nitrites (N02
-
) par passage de
l’échantillon sur une colonne de cadmium traité au cuivre (Wood, et al., 1967).
Les nitrites (en réalité NO2
- + NO3
- réduits) seront ensuite dosés par colorimétrie selon la
méthode précédemment décrite. Il suffira alors d’en déduire la concentration des nitrites
déterminés directement (sans passage de l’échantillon sur la colonne réductrice) pour trouver
les concentrations des nitrates (Rodier, et al., 1996).
2.7.5 Dosage des phosphates
En présence d’antimoine tartrate de potassium à une température de 40° C (bain-marie),
les ions orthophosphates (PO4
3) réagissent avec le molybdate d’ammonium pour former un
complexe antimoine phosphomolybdique qui sera réduit par l’acide ascorbique (Mullin, et al.,
1955). Cette forme réduite de coloration bleue a un maximum d’absorption à 880 nm.
2.7.6 Etalonnage
Cette opération nécessite la préparation pour chacun des éléments à analyser une solution
mère et une solution fille. Pour chacune de ces solutions filles, on réalise une série d’étalons
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2.7.2 Principe de dosage des sels nutritifs
La méthode utilisée pour le dosage des sels nutritifs (nitrites, nitrates et phosphates) est
basée sur une réaction de coloration. En effet, ces sels réagissent dans certaines conditions
(température, pH, présence de catalyseurs,…) avec des réactifs spécifiques pour donner une
coloration absorbant de la lumière à certaine longueur d’onde (λ). L’absorption de l’énergie
lumineuse dépend de l’intensité de la coloration, de même, ce dernier est d’autant plus
important que la solution est concentrée en sel dosé. La quantité de lumière absorbée par la
solution, appelée absorbance (A) ou densité optique (D.O), obéit à la loi de Beer-Lambert qui
est exprimée par la relation suivante :
A = D. O = Log( ) = ε. L. C ……………………………………………………..(6)
I0 et I : sont respectivement intensité lumineuse incidente et émergente du milieu absorbant.
: Le coefficient d’extinction molaire variant en fonction de la température et la longueur
d’onde.
L : La longueur du milieu traversé exprimé en cm.
C : Concentration de la solution absorbante exprimée en mole/l.
A : Absorbance de la solution.
D.O : Densité optique de la solution.
2.7.3 Dosage des nitrites
Les nitrites (N02
-
) forment un diazoïque par action avec la sulfanilamide en milieu acide
pH<2. Ce composé formera ensuite en présence de N-naphtylethylénediamine un composé
azoïque de couleur rose absorbant la lumière à 540 nm (Benschneider, et al., 1952).
2.7.4 Dosage des nitrates
La méthode est basée sur la réduction des nitrates (N03
-
) en nitrites (N02
-
) par passage de
l’échantillon sur une colonne de cadmium traité au cuivre (Wood, et al., 1967).
Les nitrites (en réalité NO2
- + NO3
- réduits) seront ensuite dosés par colorimétrie selon la
méthode précédemment décrite. Il suffira alors d’en déduire la concentration des nitrites
déterminés directement (sans passage de l’échantillon sur la colonne réductrice) pour trouver
les concentrations des nitrates (Rodier, et al., 1996).
2.7.5 Dosage des phosphates
En présence d’antimoine tartrate de potassium à une température de 40° C (bain-marie),
les ions orthophosphates (PO4
3) réagissent avec le molybdate d’ammonium pour former un
complexe antimoine phosphomolybdique qui sera réduit par l’acide ascorbique (Mullin, et al.,
1955). Cette forme réduite de coloration bleue a un maximum d’absorption à 880 nm.
2.7.6 Etalonnage
Cette opération nécessite la préparation pour chacun des éléments à analyser une solution
mère et une solution fille. Pour chacune de ces solutions filles, on réalise une série d’étalons