Chapitre 3 : Matériel et méthodes
[51]
- la spectrofluorimétrie à rayonnement ultraviolet (S.F.U.V).
- Dans ce présent travail en se basant sur la deuxième technique (S.F.U.V).
. Spectrofluorimétrie à rayonnement ultraviolet (S.F.U.V)
La SFUV sensible essentiellement aux hydrocarbures aromatiques, elle ne permet pas un
dosage au sens strict des hydrocarbures totaux dans un échantillon marin ; les teneurs mesurées
ne représentent pas réellement les concentrations absolues d'hydrocarbures. Par contre, la
réponse de fluorescence fournit un excellent indice de pollution pétrolière, du fait des très
faibles teneurs en hydrocarbures aromatiques biogènes (Représentent toutes les hydrocarbures
biogéniques produits par les organismes marins, ainsi que ceux qui proviennent de suintements
naturels à partir des fissures du plateau continental et les divers déversements continentaux
« végétaux, feu de forêt… ») dans le milieu marin. La SFUV est beaucoup plus sensible que la
SIR : la limite de détection est de l'ordre de 0,1 g/1 pour l’eau de mer (Roussel, 1983).
La SFUV est préconisée par la COI, (1984) pour la surveillance de la pollution par les
hydrocarbures en mer. Elle permet d'apprécier globalement la teneur en hydrocarbures
aromatiques. Elle est très sensible et peu sujette aux interférences. Elle ne fournit que très peu
d'informations sur la nature des produits dosés lorsque les longueurs d'onde d'excitation et
d’émission sont fixées.
2.6.1 Principe
La fluorescence est un phénomène qui se produit en deux phases
1. L’excitation : l’excitation d’une molécule par une radiation électromagnétique ultraviolette
est un phénomène rapide qui se traduit par le transfert d’un électron d’une orbitale liante vers
une orbitale antiliante. La molécule passe ainsi de son état électronique fondamental vers un
état excité. L’ensemble des transitions électroniques constitue le spectre d’excitation. La
radiation ultraviolette de même que la lumière visible possède suffisamment d’énergie pour
transférer des électrons vers des orbitales antiliantes créant ainsi un état électronique excité.
2. L’émission : le retour à un état électronique de moindre énergie ou désactivation est
relativement stable. Il fait intervenir un grand nombre de transitions produisant chacune
l’émission d’une radiation dans toutes les directions. L’ensemble des transitions constitue le
spectre d’émission du rayonnement de fluorescence. L’intensité de la fluorescence est
proportionnelle à la concentration de l’échantillon à condition que cette dernière soit comprise
dans la gamme étalon. Cette technique s‘applique en particulier aux molécules possédant des
liaisons doubles conjuguées tels que les hydrocarbures aromatiques et polyaromatiques.
2.6.2 Appareillage analytique
Les hydrocarbures polyaromatiques sont analysés avec un spectrofluorimètre HITACHI
modèle 650-10s, équipé d’une lampe à xénon avec des fentes de 1.5 nm à 20 nm et un balayage
allant de 220 à 830 nm. L’appareil contient des cellules en quartz de 1 centimètre de trajet
optique, polies sur les quatre faces. Un volume minimal de 0,5ml d’échantillon est suffisant à
l’analyse.
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- la spectrofluorimétrie à rayonnement ultraviolet (S.F.U.V).
- Dans ce présent travail en se basant sur la deuxième technique (S.F.U.V).
. Spectrofluorimétrie à rayonnement ultraviolet (S.F.U.V)
La SFUV sensible essentiellement aux hydrocarbures aromatiques, elle ne permet pas un
dosage au sens strict des hydrocarbures totaux dans un échantillon marin ; les teneurs mesurées
ne représentent pas réellement les concentrations absolues d'hydrocarbures. Par contre, la
réponse de fluorescence fournit un excellent indice de pollution pétrolière, du fait des très
faibles teneurs en hydrocarbures aromatiques biogènes (Représentent toutes les hydrocarbures
biogéniques produits par les organismes marins, ainsi que ceux qui proviennent de suintements
naturels à partir des fissures du plateau continental et les divers déversements continentaux
« végétaux, feu de forêt… ») dans le milieu marin. La SFUV est beaucoup plus sensible que la
SIR : la limite de détection est de l'ordre de 0,1 g/1 pour l’eau de mer (Roussel, 1983).
La SFUV est préconisée par la COI, (1984) pour la surveillance de la pollution par les
hydrocarbures en mer. Elle permet d'apprécier globalement la teneur en hydrocarbures
aromatiques. Elle est très sensible et peu sujette aux interférences. Elle ne fournit que très peu
d'informations sur la nature des produits dosés lorsque les longueurs d'onde d'excitation et
d’émission sont fixées.
2.6.1 Principe
La fluorescence est un phénomène qui se produit en deux phases
1. L’excitation : l’excitation d’une molécule par une radiation électromagnétique ultraviolette
est un phénomène rapide qui se traduit par le transfert d’un électron d’une orbitale liante vers
une orbitale antiliante. La molécule passe ainsi de son état électronique fondamental vers un
état excité. L’ensemble des transitions électroniques constitue le spectre d’excitation. La
radiation ultraviolette de même que la lumière visible possède suffisamment d’énergie pour
transférer des électrons vers des orbitales antiliantes créant ainsi un état électronique excité.
2. L’émission : le retour à un état électronique de moindre énergie ou désactivation est
relativement stable. Il fait intervenir un grand nombre de transitions produisant chacune
l’émission d’une radiation dans toutes les directions. L’ensemble des transitions constitue le
spectre d’émission du rayonnement de fluorescence. L’intensité de la fluorescence est
proportionnelle à la concentration de l’échantillon à condition que cette dernière soit comprise
dans la gamme étalon. Cette technique s‘applique en particulier aux molécules possédant des
liaisons doubles conjuguées tels que les hydrocarbures aromatiques et polyaromatiques.
2.6.2 Appareillage analytique
Les hydrocarbures polyaromatiques sont analysés avec un spectrofluorimètre HITACHI
modèle 650-10s, équipé d’une lampe à xénon avec des fentes de 1.5 nm à 20 nm et un balayage
allant de 220 à 830 nm. L’appareil contient des cellules en quartz de 1 centimètre de trajet
optique, polies sur les quatre faces. Un volume minimal de 0,5ml d’échantillon est suffisant à
l’analyse.