Chapitre 6:
partie expérimentale
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5. Analyse des extraits obtenus :
Les deux analyses concernées ont été faites au laboratoire de biochimie, de l’université
de Constantine (Mantouri).
5.1. Analyse par spectrophotométrie dans l’ultra violet :
Avant de passer à l’analyse HPLC, utilisant un détecteur U.V., il nous a été
indispensable de tester nos échantillons (extraits) vis-à-vis de leur absorbance dans le
domaine de l’U.V ; et même de déterminer la longueur d’onde optimale dans laquelle
ils absorbent pour pouvoir travailler en HPLC. Pour ce faire, nous avons utilisé un
spectrophotomètre dont les caractéristiques sont les suivantes :
U.V-160A (UV-visible Recording Spectrophotometer SHIMADZU)
Dimension de la cuve = (1x1x3) cm
3
λ = 100-200 nm.
5.2. Analyse par chromatographie liquide à haute performance (HPLC) :
Pour l’analyse chromatographique liquide, nous avons utilisé un appareil HPLC, PE
NELSON 1022 LC Plus. U.V-160A SHIMADZU. Applied Biosystèmes 785A
Programmable Absorbance Détecteur.
Cette analyse a été effectuée dans les conditions opératoires suivantes :
- Phase mobile : Acétonitryle- méthanol
- Phase stationnaire : nous extrait
- La colonne : NUCLEOSIL3, C3, L : 100mm, D.I :4.6mm
- Détecteur U.V ; à une langueur d’onde de 411.5 nm.
- Mode : gradient d’élution.
Composition de la phase
mobile (A : B) en ℅
90 :10
30 :70
Temps en minute
00
12