Chapitre 2
Matériels & Méthodes
36
2.5.2.2.3. Recherche et dénombrement des streptocoques fécaux :
Selon la classification sérologique de Lancefield (1933), 5 espèces sont reconnues parmi
les streptocoques fécaux (streptocoques du groupe D). Il s’agit de : S.bovis, S.equinus,
S.avium, S.faecalis et S.faecium, car les autres streptocoques ont une origine fécale douteuse.
Ils sont des témoins de contamination fécale assez résistants, y compris dans
les milieux salés (Gaujous, 1995). Ils peuvent aussi se multiplier dans les milieux présentant
des pH allant jusqu’à 9.6, on peut par conséquent les utiliser comme indicateurs d’organismes
pathogènes qui ont une résistance similaire au pH élevé (OMS, 1979).
Ils présentent une forte résistance vis-à-vis des inhibiteurs bactériens parmi lesquels,
l’azide de sodium, relativement bien toléré et fortement inhibiteur de croissance pour
les Entérobactériacea. Ce dernier entre dans la composition de presque tous les milieux
sélectifs pour streptocoques fécaux.
A- Principe :
Les principes généraux de cette méthode sont ceux décrits dans l’exposé
de la colimétrie en milieux liquides. Cependant, alors que le tube primaire contient déjà
une certaine quantité d’azide de sodium, le repiquage des tubes positifs sur un milieu
nettement plus inhibiteur (plus forte concentration en azide de sodium et présence d’éthyl
violet) ne laisse se développer que les streptocoques fécaux.
B- Mode opératoire :
Le test présomptif : Après avoir ensemencé l’eau d’échantillons dans des tubes multiples
de milieu de ROTHE en utilisant 3 tubes de doubles concentrations avec 10 ml d’eau de mer,
3 tubes de simple concentrations avec 1 ml d’eau de mer et 3 tubes de simples concentrations
avec 1 ml de chaque dilution, nous les avons incubés à 37°C pendant 48 heures.
- La lecture : tous les tubes présentant un trouble sont considérés comme positifs.
Le test confirmatif : après agitation des tubes positifs, nous avons prélevés de chacun d’eau
successivement quelques gouttes (4 à 6 gouttes) et nous les avons reportées dans des tubes
de milieu de Litsky à l’éthyl violet et azide de sodium (EVA). On incube à 37° pendant
24 heures.
- La lecture : les tubes dont le trouble est important (jaune) et/ou présentent une pastille
violette au fond sont considérés comme positifs et confirment la présence
de Streptococcus-D-feocalis.
La figure 2.23 récapitule la méthode utilisée.
Matériels & Méthodes
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2.5.2.2.3. Recherche et dénombrement des streptocoques fécaux :
Selon la classification sérologique de Lancefield (1933), 5 espèces sont reconnues parmi
les streptocoques fécaux (streptocoques du groupe D). Il s’agit de : S.bovis, S.equinus,
S.avium, S.faecalis et S.faecium, car les autres streptocoques ont une origine fécale douteuse.
Ils sont des témoins de contamination fécale assez résistants, y compris dans
les milieux salés (Gaujous, 1995). Ils peuvent aussi se multiplier dans les milieux présentant
des pH allant jusqu’à 9.6, on peut par conséquent les utiliser comme indicateurs d’organismes
pathogènes qui ont une résistance similaire au pH élevé (OMS, 1979).
Ils présentent une forte résistance vis-à-vis des inhibiteurs bactériens parmi lesquels,
l’azide de sodium, relativement bien toléré et fortement inhibiteur de croissance pour
les Entérobactériacea. Ce dernier entre dans la composition de presque tous les milieux
sélectifs pour streptocoques fécaux.
A- Principe :
Les principes généraux de cette méthode sont ceux décrits dans l’exposé
de la colimétrie en milieux liquides. Cependant, alors que le tube primaire contient déjà
une certaine quantité d’azide de sodium, le repiquage des tubes positifs sur un milieu
nettement plus inhibiteur (plus forte concentration en azide de sodium et présence d’éthyl
violet) ne laisse se développer que les streptocoques fécaux.
B- Mode opératoire :
Le test présomptif : Après avoir ensemencé l’eau d’échantillons dans des tubes multiples
de milieu de ROTHE en utilisant 3 tubes de doubles concentrations avec 10 ml d’eau de mer,
3 tubes de simple concentrations avec 1 ml d’eau de mer et 3 tubes de simples concentrations
avec 1 ml de chaque dilution, nous les avons incubés à 37°C pendant 48 heures.
- La lecture : tous les tubes présentant un trouble sont considérés comme positifs.
Le test confirmatif : après agitation des tubes positifs, nous avons prélevés de chacun d’eau
successivement quelques gouttes (4 à 6 gouttes) et nous les avons reportées dans des tubes
de milieu de Litsky à l’éthyl violet et azide de sodium (EVA). On incube à 37° pendant
24 heures.
- La lecture : les tubes dont le trouble est important (jaune) et/ou présentent une pastille
violette au fond sont considérés comme positifs et confirment la présence
de Streptococcus-D-feocalis.
La figure 2.23 récapitule la méthode utilisée.