Chapitre III : Matériel et méthodes
Impact de la pollution marine par les hydrocarbures
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b) Etalonnage :
La C.O.I (1984) préconise le chrysène comme principale substance de référence
pour le dosage spectroscopique par fluorescence.
C) Préparation des standards :
On prépare une solution mère de chrysène (C18H12) a 0,1mg/ml et ceci en diluant
1mg de chryséne dans 10ml d’Hexane.
Tableau 04 : Les différents standards préparés à partir de cette solution.
Code standard S1
S2
S3
S4
S5
[C]µg/ml
0 ,2
0,4
0,6
0,8
1
U.A
0,85
1,4
2,15
2,8
5,45
2) Mesure des intensités de fluorescences :
La lecture des intensités de fluorescences (I.F) exige d’opérer avec les conditions suivantes :
 Longueur d’onde d’excitation : 310nm
 Longueur d’onde d’émission : 360nm, 380nm, 410nm.
 Les fentes d’excitation et d’émission sont respectivement fixées à 2 nm et 5 nm
 L’intensité de fluorescence (I.F) est proportionnelle à la concentration de
l’échantillon (Réf H), selon la relation :
IF = a X+b
……………… (3.3)
IF : Intensité de la fluorescence en unité arbitraire (U.V)
a : Pente de la droite
X : Concentration en Hydrocarbure polyaromatique (HPA) en µg/ml
B : Ordonnée à l’origine
Les meilleures réponses étant obtenues pour 360nm, les calculs sont effectués en fonction
de cette réponse.
La droite d’étalonnage est représentée dans la figure (III.17).