CHAPITRE II: Matériels et Méthodes
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En effet, prendre 25g de sédiment à analyser et lui rajouter 225 ml d’eau distillée stérile
dans un flacon stérile, bien homogénéiser le tout (dilution mère : 10
-1
), prendre 10 ml à l’aide
d’une pipette graduée stérile de DM pour la mettre dans un tube stérile (10
-1 ), de même
préparer d’autre dilutions : 10
-2 et 10
-3 .
II.2.4.2.1. Numération des coliformes totaux et des coliformes fécaux
Après avoir agité ensemencer à partir de chaque dilution, 1 ml dans chaque tube
contenant 10 ml du bouillon lactosé bilié au vert brillant (BLBVB) et une cloche de Durham,
l’incubation se fait à 37°C pour les tubes destinés à dénombrer les coliformes totaux et à 44°C
pour les coliformes fécaux pendant 48 h.
Lecture : Les tubes présentant un trouble avec production de gaz sont considérés comme
positifs.
Le résultat est donné en nombre de germes pour 100ml en se référant à la table NPP.
II.2.4.2.2. Numération des streptocoques fécaux
La numération des streptocoques fécaux s’effectue en deux étapes :
a) Test présomptif
Ensemencer une série de tubes contenant 10ml du milieu Rothe simple concentré, par
1ml de chaque dilution. L’incubation se fait à 37°C pendant 48 h.
Les tubes présentant un trouble accompagné d’un dépôt blanchâtre sont présumés de
contenir des streptocoques fécaux, ils seront soumis à un test confirmatif.
b) Test confirmatif
Chaque tube positif est ensemencé sur le bouillon de Eva Litsky, l’incubation
s’effectue pendant 48 h à 37°C. Les tubes présentant un trouble accompagné d’un dépôt
formant une pastille violette, contiennent des streptocoques fécaux.