Chapitre II
Matériel et méthodes
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4.3.2. Dénombrement et recherche de la flore contenue dans les oursins
Notre étude consiste à l’analyse bactériologique des oursins afin de comparer les résultats
avec ceux obtenus pour les eaux de surface dans lesquelles ils se trouvent naturellement. Les
différentes étapes de préparation de la suspension mère et des dilutions sont illustrées dans la figure
II.19.
4.3.2.1 Recherche et dénombrement des coliformes par incorporation en milieu gélosé
A l’aide d’une pipette Pasteur stérile, mettre 20 gouttes de chaque dilution sur le fond d’une
boite de Pétri petite, répéter l’opération deux fois pour chaque dilution, Numéroter successivement,
couler sur la gélose de désoxycholate 1‰ fondue puis refroidie à 45°C. Bien homogénéiser
l’inoculum et la gélose en faisant des mouvements circulaires et de va et vient en forme de « 8 » et
laisser solidifier. Incuber les boites pendant 24 - 48 heures à 37°C pour les coliformes totaux et à
44°C pour les thermotolérants. (tableau II. I).
 Lecture :
Le dénombrement des coliformes se fait par comptage des colonies roses sous formes lenticulaire.
Evaluation du nombre de CT :
Retenir les boites de deux dilutions successives donnant un nombre comprise entre 15 et 150
colonies.
 du nbre des colonies des 2 boites retenues
CT =
1,1 . d
1,1 : constante
d : première dilution retenue
25g de chair
des oursins
+225 ml
d’eau
physiologique
stérile
1ml
D10
-2
+ 9ml
E.P.S
1ml
D 10
-1
+ 9ml
E.P.S
1ml
D10
-3
+ 9ml
E.P.S
Figure II.19 : Technique de préparation des dilutions
Figure 16 : Technique de préparation des dilutions