Chapitre III
Matériels et méthodes
27
III.2.3. Analyse microbiologique dans l’eau de mer
Les germes test recherchés sont les coliformes totaux, fécaux, les vibrions et les salmonelles.
III.2.3.1. Dénombrement des coliformes
Dans notre étude nous avons opté pour la méthode de filtration sur membrane pour estimer la charge
bactérienne dans la zone d’étude. C’est la méthode de concentration la plus utilisée au laboratoire,
pour sa facilité et sa reproductibilité. Elle consiste en une filtration de l’eau sur des membranes de
porosité 0,45µm susceptibles de retenir les bactéries avec un quadrillage en surface facilitant les
dénombrements.
a) Matériel :
- Dispositif de filtration de marque « Sartorius stedim » (photo.III.20)
- Bec-Bunsen pour garder tout au long de la manipulation la zone de travail stérile ;
- Boites de Pétri avec les milieux de culture spécifiques pour chaque germe ;
- Membranes d’ester de cellulose, filtrantes, quadrillées et stériles (en emballage individuel) de
porosité de 0.45µm et de 47 mm de diamètre susceptibles de retenir les bactéries ;
- Deux Incubateurs (Etuves) ;
- Pompe à vide ;
- Pinces stérilisées et Pipettes.
b) Mode opératoire
- Stériliser le dispositif de filtration ;
- Mettre en place le dispositif ;
- Mettre le filtre sur la grille ;
- Filtrer un volume d’échantillon (100ml) ;
- Déposer le filtre sur le milieu de culture adapté pour chaque bactérie recherchée;
- Incuber les boites à la température adéquate.
La composition des milieux de culture et des réactifs utilisés est consignée en annexe III.
c) Dénombrement des Coliformes totaux et Coliformes thermotolérants «Fécaux» (CF)
Cette méthode conduit à un dénombrement présomptif des coliformes totaux et des coliformes fécaux.
Le nombre de colonies trouvées sera exprimé en Unité Formant Colonie dans 100 ml d’eau filtrée
(UFC/100ml). La flore bactérienne associée est généralement beaucoup moins abondante dans la boîte
incubée à 44°C (Figure.III.7).
Photo III.20. Dispositif de l’appareil de filtration sur membrane.
Matériels et méthodes
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III.2.3. Analyse microbiologique dans l’eau de mer
Les germes test recherchés sont les coliformes totaux, fécaux, les vibrions et les salmonelles.
III.2.3.1. Dénombrement des coliformes
Dans notre étude nous avons opté pour la méthode de filtration sur membrane pour estimer la charge
bactérienne dans la zone d’étude. C’est la méthode de concentration la plus utilisée au laboratoire,
pour sa facilité et sa reproductibilité. Elle consiste en une filtration de l’eau sur des membranes de
porosité 0,45µm susceptibles de retenir les bactéries avec un quadrillage en surface facilitant les
dénombrements.
a) Matériel :
- Dispositif de filtration de marque « Sartorius stedim » (photo.III.20)
- Bec-Bunsen pour garder tout au long de la manipulation la zone de travail stérile ;
- Boites de Pétri avec les milieux de culture spécifiques pour chaque germe ;
- Membranes d’ester de cellulose, filtrantes, quadrillées et stériles (en emballage individuel) de
porosité de 0.45µm et de 47 mm de diamètre susceptibles de retenir les bactéries ;
- Deux Incubateurs (Etuves) ;
- Pompe à vide ;
- Pinces stérilisées et Pipettes.
b) Mode opératoire
- Stériliser le dispositif de filtration ;
- Mettre en place le dispositif ;
- Mettre le filtre sur la grille ;
- Filtrer un volume d’échantillon (100ml) ;
- Déposer le filtre sur le milieu de culture adapté pour chaque bactérie recherchée;
- Incuber les boites à la température adéquate.
La composition des milieux de culture et des réactifs utilisés est consignée en annexe III.
c) Dénombrement des Coliformes totaux et Coliformes thermotolérants «Fécaux» (CF)
Cette méthode conduit à un dénombrement présomptif des coliformes totaux et des coliformes fécaux.
Le nombre de colonies trouvées sera exprimé en Unité Formant Colonie dans 100 ml d’eau filtrée
(UFC/100ml). La flore bactérienne associée est généralement beaucoup moins abondante dans la boîte
incubée à 44°C (Figure.III.7).
Photo III.20. Dispositif de l’appareil de filtration sur membrane.