Chapitre III
Matériels et méthodes
23
3.3.3. Méthode d’analyse des hydrocarbures
La méthode adoptée pour l’analyse des hydrocarbures poly aromatiques est la
spectrofluorimétrie ultra-violet (SFUV), sensible essentiellement aux hydrocarbures
aromatiques. Elle est préconisée par le C.O.I (1982,1984) et (Marchand, 1983).
3.3.3.1 Principe de la spectrofluorimétrie ultrat-violet (SFUV)
Cette méthode permet de mesurer la fluorescence émise par des molécules soumises à
des rayonnements ultrat-violet. Elle est très utilisée par le dosage direct des substances fortes
diverses comportant un noyau aromatique ou un hétérocycle (Audigie et al, 1983).
Une réponse de fluorescence représente ainsi un bon indice de pollution pétrolière du
fait que les hydrocarbures aromatiques biogènes sont très faiblement représentés dans le
milieu marin (Bodennec et al, 1983).
3.3.3.2 Appareillage :
Les hydrocarbures poly-aromatiques sont analysés avec un spectrofluorimétrie HITACHI
modèle « 650-105 » (high sensitivity), équipé d’une lampe à xénon avec des fentes de 1.5 nm
à 20 nm et un balayage allant de 220 à 830 nm (Figure II.11). L’appareil contient des cellules
en quartz de 1 centimètre de trajet optique, polies sur les quatre faces. Un volume minimal de
0,5ml d’échantillon est suffisant à l’analyse.
Figure 11-Spectrophotomètre de Fluorescence HITACHI,Modèle 650 S, équipé d’une lampe
« Xénon ».
3.3.3.3 Etalonnage de l’appareil
A l’heure actuelle, on ne dispose pas de substance de référence totalement satisfaisante pour
le dosage spectroscopie par fluorescence. C’est pourquoi il est recommandé aux laboratoires
d’utiliser le chrysene comme principale substance de référence (U.N.E.S.C.O, 1984).
3.3.3.4 Préparation des standards
On prépare une solution mère de chrysene (C 18 H 12 ) à 200 µg/ml, on diluant 2 mg de chrysene
dans 10 ml d’Hexane, à ce moment une solution fille de concentration 8 µg/ml est préparée
dans une fiole de 25 ml, le tableau suivant donne les concentrations des différents standards
obtenus à partir de cette dernière solution.
Tableau 02-Concentration des standards (µg/ml)
Matériels et méthodes
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3.3.3. Méthode d’analyse des hydrocarbures
La méthode adoptée pour l’analyse des hydrocarbures poly aromatiques est la
spectrofluorimétrie ultra-violet (SFUV), sensible essentiellement aux hydrocarbures
aromatiques. Elle est préconisée par le C.O.I (1982,1984) et (Marchand, 1983).
3.3.3.1 Principe de la spectrofluorimétrie ultrat-violet (SFUV)
Cette méthode permet de mesurer la fluorescence émise par des molécules soumises à
des rayonnements ultrat-violet. Elle est très utilisée par le dosage direct des substances fortes
diverses comportant un noyau aromatique ou un hétérocycle (Audigie et al, 1983).
Une réponse de fluorescence représente ainsi un bon indice de pollution pétrolière du
fait que les hydrocarbures aromatiques biogènes sont très faiblement représentés dans le
milieu marin (Bodennec et al, 1983).
3.3.3.2 Appareillage :
Les hydrocarbures poly-aromatiques sont analysés avec un spectrofluorimétrie HITACHI
modèle « 650-105 » (high sensitivity), équipé d’une lampe à xénon avec des fentes de 1.5 nm
à 20 nm et un balayage allant de 220 à 830 nm (Figure II.11). L’appareil contient des cellules
en quartz de 1 centimètre de trajet optique, polies sur les quatre faces. Un volume minimal de
0,5ml d’échantillon est suffisant à l’analyse.
Figure 11-Spectrophotomètre de Fluorescence HITACHI,Modèle 650 S, équipé d’une lampe
« Xénon ».
3.3.3.3 Etalonnage de l’appareil
A l’heure actuelle, on ne dispose pas de substance de référence totalement satisfaisante pour
le dosage spectroscopie par fluorescence. C’est pourquoi il est recommandé aux laboratoires
d’utiliser le chrysene comme principale substance de référence (U.N.E.S.C.O, 1984).
3.3.3.4 Préparation des standards
On prépare une solution mère de chrysene (C 18 H 12 ) à 200 µg/ml, on diluant 2 mg de chrysene
dans 10 ml d’Hexane, à ce moment une solution fille de concentration 8 µg/ml est préparée
dans une fiole de 25 ml, le tableau suivant donne les concentrations des différents standards
obtenus à partir de cette dernière solution.
Tableau 02-Concentration des standards (µg/ml)