Chapitre 3
Matériels et Méthodes
49
a. Principe de la méthode
La méthode décrite, fondée sur la réaction de Griess, et appliquée à l’eau de mer par
Bendschneider et Robinson (1952). Les ions nitrite forment un diazoïque avec la
sulfanilamide en milieu acide (pH < 2), puis le diazoïque réagit avec le N-naphtyléthylènediamine pour former le colorant rose absorbe à la longueur d’onde de 543 nm.
b. Les réactifs exigés
Ø Réactif 1 : solution de sulfanilamide.
Ø Réactif 2 : solution de N-Naphtyl-éthylènediamine.
Ø Solution étalon primaire de nitrite.
Ø solution étalon secondaire de nitrite.
La préparation des réactifs est décrite en annexe 4.
c. Etalonnage
Ø Introduire, dans des fioles jaugées de 100 ml, 0,4 ml -0,8 ml -1,2 ml -1,6 ml -2 ml -
2,4 ml de l’étalon secondaire et compléter à 100ml avec l’eau distillée, afin
d’obtenir la gamme de concentrations : 0,2 µmole/l -0,4 µmole/l -0,6 µmole/l -0,8
µmole/l -1 µmole/l -1,2µmole/l, (à refaire 3 fois).
Ø Faire l’analyse de ces étalons selon le processus décrit pour les nitrites.
Ø Mesurer l’absorbance et tracer la courbe d’étalonnage.
La courbe d'étalonnage établit (Figure 3.19) a pour équation y = 0,047x avec R² = 0,999.
Figure 3.20 : Courbe d’étalonnage des nitrites.
y = 0,047x
R² = 0,999
0
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
0,06
0
0,5
1
1,5
ABS
µmol/l
Matériels et Méthodes
49
a. Principe de la méthode
La méthode décrite, fondée sur la réaction de Griess, et appliquée à l’eau de mer par
Bendschneider et Robinson (1952). Les ions nitrite forment un diazoïque avec la
sulfanilamide en milieu acide (pH < 2), puis le diazoïque réagit avec le N-naphtyléthylènediamine pour former le colorant rose absorbe à la longueur d’onde de 543 nm.
b. Les réactifs exigés
Ø Réactif 1 : solution de sulfanilamide.
Ø Réactif 2 : solution de N-Naphtyl-éthylènediamine.
Ø Solution étalon primaire de nitrite.
Ø solution étalon secondaire de nitrite.
La préparation des réactifs est décrite en annexe 4.
c. Etalonnage
Ø Introduire, dans des fioles jaugées de 100 ml, 0,4 ml -0,8 ml -1,2 ml -1,6 ml -2 ml -
2,4 ml de l’étalon secondaire et compléter à 100ml avec l’eau distillée, afin
d’obtenir la gamme de concentrations : 0,2 µmole/l -0,4 µmole/l -0,6 µmole/l -0,8
µmole/l -1 µmole/l -1,2µmole/l, (à refaire 3 fois).
Ø Faire l’analyse de ces étalons selon le processus décrit pour les nitrites.
Ø Mesurer l’absorbance et tracer la courbe d’étalonnage.
La courbe d'étalonnage établit (Figure 3.19) a pour équation y = 0,047x avec R² = 0,999.
Figure 3.20 : Courbe d’étalonnage des nitrites.
y = 0,047x
R² = 0,999
0
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
0,06
0
0,5
1
1,5
ABS
µmol/l