Chapitre 3
Matériels et Méthodes
47
La quantité de lumière absorbée par la solution, appelée absorbance (A) ou densité optique
(D.O), obéit à la loi de BEER-LAMBERT qui est exprimée par la relation suivante :
A = D.O. = Log (Io / I) = ε.L.C
— Io et I sont respectivement les intensités lumineuses incidentes et émergentes du
milieu absorbant.
— A : Absorbance ou densité optique (D.O.).
— L : trajet optique (épaisseur du milieu absorbant).
— ε : coefficient d’extinction molaire, variant entre la température et longueur d’onde.
— C : concentration du milieu absorbant.
II.4.2. Appareillages
Ø spectrophotomètre de marque HITACHI U-2001 (Figure 3.18, annexe2).
Ø Appareils courants de laboratoire.
II.4.3. L’analyse des sels nutritifs
Les réactifs, les solutions étalons, et les protocoles de dosage pour chaque élément nutritif
sont réalisés selon les protocoles décrits par (Aminot et al., 1983).
II.4.3.1. Dosage de l’azote ammoniacal N-NH4
+
a. Principe de la méthode
La méthode décrite mesure la totalité de l’azote ammoniacal, soit N-NH3 + N-NH4
+ . Il
s’agit de la méthode Koroleff (1969). Dans un premier temps, l’ammoniac forme une
monochloramine avec l’hypochlorite en milieu légèrement basique. Cette dernière réagit
avec le phénol en présence d’un excès d’hypochlorite pour former le bleu d’indo-phénol
absorbe à 630 nm.
b. Les réactifs exigés
Ø Réactifs 1 : solution de phénol-nitroprussiate.
Ø Réactifs 2 : solution alcaline d’hypochlorite.
Ø Solution étalon primaire d’ammonium .
Ø Solution étalon secondaire d’ammonium.
La préparation des réactifs est décrite en annexe 4.
Matériels et Méthodes
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La quantité de lumière absorbée par la solution, appelée absorbance (A) ou densité optique
(D.O), obéit à la loi de BEER-LAMBERT qui est exprimée par la relation suivante :
A = D.O. = Log (Io / I) = ε.L.C
— Io et I sont respectivement les intensités lumineuses incidentes et émergentes du
milieu absorbant.
— A : Absorbance ou densité optique (D.O.).
— L : trajet optique (épaisseur du milieu absorbant).
— ε : coefficient d’extinction molaire, variant entre la température et longueur d’onde.
— C : concentration du milieu absorbant.
II.4.2. Appareillages
Ø spectrophotomètre de marque HITACHI U-2001 (Figure 3.18, annexe2).
Ø Appareils courants de laboratoire.
II.4.3. L’analyse des sels nutritifs
Les réactifs, les solutions étalons, et les protocoles de dosage pour chaque élément nutritif
sont réalisés selon les protocoles décrits par (Aminot et al., 1983).
II.4.3.1. Dosage de l’azote ammoniacal N-NH4
+
a. Principe de la méthode
La méthode décrite mesure la totalité de l’azote ammoniacal, soit N-NH3 + N-NH4
+ . Il
s’agit de la méthode Koroleff (1969). Dans un premier temps, l’ammoniac forme une
monochloramine avec l’hypochlorite en milieu légèrement basique. Cette dernière réagit
avec le phénol en présence d’un excès d’hypochlorite pour former le bleu d’indo-phénol
absorbe à 630 nm.
b. Les réactifs exigés
Ø Réactifs 1 : solution de phénol-nitroprussiate.
Ø Réactifs 2 : solution alcaline d’hypochlorite.
Ø Solution étalon primaire d’ammonium .
Ø Solution étalon secondaire d’ammonium.
La préparation des réactifs est décrite en annexe 4.