Chapitre III : Matériels et méthodes
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 L’absorption de l’énergie lumineuse dépend de l’intensité de la coloration, de
même, ce dernier est d’autant plus importante que la solution est concentrée en sel
dosé.
 La quantité de lumière absorbée par la solution, appelée absorbance (Abs) ou
densité optique (D.O), obéit à la loi de BEER-LAMBERT qui est exprimée par la
relation suivante :
 Io et I sont respectivement les intensités lumineuses incidentes et émergentes du milieu
absorbant.
 Abs : Absorbance ou densité optique (D.O.).
 L : trajet optique (épaisseur du milieu absorbant).
 Ɛ : coefficient d’extinction molaire, variant entre la température et longueur d’onde.
 C : concentration du milieu absorbant.
 Mode opératoire
La préparation des réactifs et des solutions étalons est détaillée pour le dosage de chaque
sel en (annexe 3).
 L’étalonnage :
Cette opération nécessite la préparation d’une solution mère à 5000 µmol/l puis une
solution étalon secondaire à 500 µmol/l pour chaque élément à analyser. On prépare
ensuite notre gamme-étalons plus diluées et jaugées à 50 ml à des concentrations de : 0,5 /
1 / 1,5 / 2 et 2,5 µmol/l en prélevant 0,1-0,2-0,3-0,4 et 0,5 ml de l'étalon secondaire.
On ajoute pour chaque étalon le réactif appropriée à l’élément à analyser. La lecture de
l’absorbance se fait par le spectrophotomètre de marque HITACHI U.V U- 2001, soit
Abs br . Figure (III.20)
 Les blancs
Blanc réactif
Prendre 50 ml d’eau distillée et ajouter le réactif approprié à l’élément à analyser afin de
mesurer l’absorbance produite par les réactifs eux-mêmes. Faire la mesure de l’absorbance
soit b r .
La préparation du blanc réactif est nécessaire pour chaque série d’analyse.
Abs = D.O. = Log (Io / I) = Ɛ*L*C