Chapitre III
Matériel et méthodes d’analyse
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III.4.4.2. Matrice sédiment
• Recherche des Coliformes totaux, des Coliformes thérmotolérants et des
streptocoques fécaux par la technique du nombre le plus probable
La technique de fermentation en tubes multiples, aussi appelée technique du nombre le
plus probable (NPP), sert à estimer le nombre de bactéries dans un échantillon. Elle est
particulièrement utile pour analyser les échantillons solides ou les échantillons liquides qui
sont turbides et qui peuvent difficilement être analysés par la technique des membranes
filtrantes.
Elle repose sur une analyse statistique et fournit par calcul des nombres les plus probables
(NPP). Il existe de nombreuses variantes à la méthode en fonction de la charge microbienne à
évaluer.
Cette méthode suppose que le micro-organisme est normalement distribué dans le milieu et
donc qu’un même volume d’échantillon contient en moyenne le même nombre de
microorganismes (en réalité il en contient un peu plus ou un peu moins) ; le nombre le plus
probable correspond à la valeur moyenne.
Dans le protocole présenté ci-dessous, l’échantillon est d’abord dilué et chaque dilution est
ensemencée dans une série de trois tubes. (OMS/PNUE, 1995).
Sédiment
16g de
sédiment
16ml
16ml
Dilution
10
-1
Dilution
10
-2
Dilution
10
-3
Bien vortexer
Bien vortexer
Bien vortexer
Figure III.15: Préparation des dilutions.