Annexes
ANNEXE 02:
Le milieu Tris – Acétate – Phosphate (TAP) (Andersen, 2005) :
Pour 1L de milieu :
Solution 2X Filner’sBeijernicks
25 mL
1M Potassium Phosphate
1 mL
Trace minéral solution
5 mL
Tris-base
2.42 g
Acide Acétique Glacial (17.4 mMacétate)
1 mL
PH doit être de 7.2
2X Filner’sBeijernicks solution (500 mL)
NH4Cl
8g
CaCl 2. 2H2O
1g
MgSO4. 7H2O
2g
Ajuster avec l’eau distillée 500ml et stocker à 4°C après autoclavage.
Trace minéral solution (500mL)
5 g disodium EDTA – dissout dans 400 ml d’eau avec chauffage sous agitation
Neutraliser à PH 6.5 avec du NaoH = 5N
Puis ajouter les sels suivants un à un, une fois le sel complétement dissout.
FeSO4. 7H2O 0.5g
ZnSO4. 7H2O
2.2 g
H3BO3
1.14 g
MnCl2. 4H2O
0.51 g
CuSO 4. 5H2O
0.016 g
Na2MoO4. 2H2O
0.073 g
CoCl2. 6H2O
0.016 g
Compléter à 500ml puis autoclavé (la solution est vert pale puis devient de couleur
pourpre).
1M Potassium Phosphate Stock (50mL)
20 ml 1M stock KH2PO4
(1M stock: 6.8g/ 50ml)
30 ml 1M stock K2HPO4
(1M stock: 8.7g/ 50ml)
PH =7.2
Pour les cultures solides 13 g d’agar sont ajoutées à 1 litre de milieu avant autoclavage.