Matériels et Méthodes
- Les microalgues sont prélevées à l’aide d’une pipette pasteur et introduites sur la
zone de comptage (entre lame et lamelle) par capillarité.
- Le comptage des microalgues mobiles n’est possible que si elles sont préalablement
tuées. pour ce faire on a ajouté trois gouttes du mélange (2ml du formol + 8ml
d’eau distillé) dans 4ml de la culture microalgale (Audineau, 1985).
II-4-3- Dosage des chlorophylles :
Etant donné que les microalgues contiennent de la chlorophylle, l'estimation de ce
pigment est bien élaborée, méthode fiable pour le calcul de la biomasse algale.
Selon la souche de microalgue examinée, les solvants comme l'acétone (80% ou 100%),
l'éthanol (Sartory, 1982 ; Becker, 1994) ou le diéthyléther (Becker, 1994) sont utilisés
pour extraire le pigment des cellules de microalgues. Selon Stewart (1974) ; Sartory
(1982) le méthanol est aussi utilisée comme un solvant pour l’extraction des pigments à
partir des microalgues.
Marker, 1972 a trouvé que le méthanol est un meilleur solvant d’extraction des
chlorophylles.
Les étapes suivantes sont recommandées pour la préparation de l'extrait de
chlorophylle (Becker, 1994) :
1 - centrifuger 4ml de la culture microalgale à 4000 tour pendant 10 minutes et jeter le
surnageant. En laissant que le culot qui contient les cellules microalgues qu’ils sont lavées
avec de l’eau distillé et centrifuger une autre fois.
2 - Suspendre les cellules dans 4 ml de méthanol à (100%). Le tube est mis à l’obscurité.
Les cellules se détruisent et reste que les plastes qui contiennent de la chlorophylle.
Dans certains cas, un bref chauffage est nécessaire pour réaliser l'extraction du pigment
complet. Après que les débris cellulaires sont éliminés par centrifugation ou filtration;
l'extrait doit être protégé de la lumière pour éviter la décoloration des pigments.
La concentration de chlorophylle dans l'extrait est obtenue en lisant l'absorption de l'extrait
de pigment dans un spectrophotomètre (UV- visible) à des longueurs d’onde (470, 652.4 et
665.2 nm). La quantité des pigments est calculée selon les équations suivantes (Formule de
Lichtenthaler, 1987) :
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- Les microalgues sont prélevées à l’aide d’une pipette pasteur et introduites sur la
zone de comptage (entre lame et lamelle) par capillarité.
- Le comptage des microalgues mobiles n’est possible que si elles sont préalablement
tuées. pour ce faire on a ajouté trois gouttes du mélange (2ml du formol + 8ml
d’eau distillé) dans 4ml de la culture microalgale (Audineau, 1985).
II-4-3- Dosage des chlorophylles :
Etant donné que les microalgues contiennent de la chlorophylle, l'estimation de ce
pigment est bien élaborée, méthode fiable pour le calcul de la biomasse algale.
Selon la souche de microalgue examinée, les solvants comme l'acétone (80% ou 100%),
l'éthanol (Sartory, 1982 ; Becker, 1994) ou le diéthyléther (Becker, 1994) sont utilisés
pour extraire le pigment des cellules de microalgues. Selon Stewart (1974) ; Sartory
(1982) le méthanol est aussi utilisée comme un solvant pour l’extraction des pigments à
partir des microalgues.
Marker, 1972 a trouvé que le méthanol est un meilleur solvant d’extraction des
chlorophylles.
Les étapes suivantes sont recommandées pour la préparation de l'extrait de
chlorophylle (Becker, 1994) :
1 - centrifuger 4ml de la culture microalgale à 4000 tour pendant 10 minutes et jeter le
surnageant. En laissant que le culot qui contient les cellules microalgues qu’ils sont lavées
avec de l’eau distillé et centrifuger une autre fois.
2 - Suspendre les cellules dans 4 ml de méthanol à (100%). Le tube est mis à l’obscurité.
Les cellules se détruisent et reste que les plastes qui contiennent de la chlorophylle.
Dans certains cas, un bref chauffage est nécessaire pour réaliser l'extraction du pigment
complet. Après que les débris cellulaires sont éliminés par centrifugation ou filtration;
l'extrait doit être protégé de la lumière pour éviter la décoloration des pigments.
La concentration de chlorophylle dans l'extrait est obtenue en lisant l'absorption de l'extrait
de pigment dans un spectrophotomètre (UV- visible) à des longueurs d’onde (470, 652.4 et
665.2 nm). La quantité des pigments est calculée selon les équations suivantes (Formule de
Lichtenthaler, 1987) :
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