4. Décapsulation :
Dès que les cystes hydratés seront mis dans la solution de décapsulation la réaction
exothermique des ions d'hypochlorite avec de la chitine et les lipoprotéines du chorion, La
couleur des Cystes changera graduellement.
Refroidir la solution au 15-20°C (par exemple en plaçant le bac de décapsulation dans un bain
rempli avec d’eau). Vérifier la température régulièrement, puisque la réaction est exothermique
; ne jamais dépasser les 40°C (si nécessaire ajouter la glace à la solution de décapsulation).
Vérifier l'évolution du processus de décapsulation régulièrement sous loupe binoculaire.
5. Lavage et désactivation :
Quand les cystes deviennent gris (avec le décolorant en poudre) ou orange (avec le décolorant
liquide), l’examen microscopique montre la dissolution presque complète de la coquille du
cyste (= après 3-15 mn),
Enlever les cystes de la suspension de décapsulation et rincés avec de l'eau sur un tamis de 125
µm jusqu'à ce qu'aucune odeur de chlore ne soit détectée. Il est crucial de ne pas laisser les
embryons dans la solution dans la solution de décapsulation plus longtemps, puisque ceci
affectera leur viabilité.
Pour la désactivation ; il faut éliminer toute traces d'hypochlorite en plongeant les cystes (< 1
mn) dans une solution de HCL de 0.1 N ou dans la solution Na 2 S 2 O 3 de 0.1 %, puis les rincer
avec de l'eau. Des résidus d'hypochlorite peuvent être détectés en mettant quelques cystes
décapsulés en petite quantité d'indicateur d'amidon-iodine. Quand le réactif vire au bleu, le
lavage et la désactivation doit être continué.
6. Stockage :
Les cystes peuvent être stockés pendant quelques jours dans le réfrigérateur (0-4°C) ou tous
autres entreposages au froid avant l'incubation pour l’éclosion.
Pour l'entreposage à long terme des cystes doivent être déshydratés dans une solution de
saumure saturée (1 g de cystes secs par 10 ml de saumure de 300g de NaCl /l). La saumure doit
être renouvelée après 24h.Leurs teneur en eau a été abaissée environ à 20 % et ils peuvent être
stockés dans un réfrigérateur pendant plusieurs semaines sans perdre leur viabilité.
Dès que les cystes hydratés seront mis dans la solution de décapsulation la réaction
exothermique des ions d'hypochlorite avec de la chitine et les lipoprotéines du chorion, La
couleur des Cystes changera graduellement.
Refroidir la solution au 15-20°C (par exemple en plaçant le bac de décapsulation dans un bain
rempli avec d’eau). Vérifier la température régulièrement, puisque la réaction est exothermique
; ne jamais dépasser les 40°C (si nécessaire ajouter la glace à la solution de décapsulation).
Vérifier l'évolution du processus de décapsulation régulièrement sous loupe binoculaire.
5. Lavage et désactivation :
Quand les cystes deviennent gris (avec le décolorant en poudre) ou orange (avec le décolorant
liquide), l’examen microscopique montre la dissolution presque complète de la coquille du
cyste (= après 3-15 mn),
Enlever les cystes de la suspension de décapsulation et rincés avec de l'eau sur un tamis de 125
µm jusqu'à ce qu'aucune odeur de chlore ne soit détectée. Il est crucial de ne pas laisser les
embryons dans la solution dans la solution de décapsulation plus longtemps, puisque ceci
affectera leur viabilité.
Pour la désactivation ; il faut éliminer toute traces d'hypochlorite en plongeant les cystes (< 1
mn) dans une solution de HCL de 0.1 N ou dans la solution Na 2 S 2 O 3 de 0.1 %, puis les rincer
avec de l'eau. Des résidus d'hypochlorite peuvent être détectés en mettant quelques cystes
décapsulés en petite quantité d'indicateur d'amidon-iodine. Quand le réactif vire au bleu, le
lavage et la désactivation doit être continué.
6. Stockage :
Les cystes peuvent être stockés pendant quelques jours dans le réfrigérateur (0-4°C) ou tous
autres entreposages au froid avant l'incubation pour l’éclosion.
Pour l'entreposage à long terme des cystes doivent être déshydratés dans une solution de
saumure saturée (1 g de cystes secs par 10 ml de saumure de 300g de NaCl /l). La saumure doit
être renouvelée après 24h.Leurs teneur en eau a été abaissée environ à 20 % et ils peuvent être
stockés dans un réfrigérateur pendant plusieurs semaines sans perdre leur viabilité.