CHAPITRE II
Matériel et méthodes
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d. Recherche de l’oxydase :
L’oxydase ou Cytochrome oxydase est une enzyme présente dans certaines chaines respiratoires
cytochromiques bactériennes. La recherche de cette enzyme est utile dans le diagnostic des bacilles à
Gram
-
. Les entérobactéries dont E.coli sont oxydases(-) alors que les vibrionacées sont oxydase (+).
 Mode opératoire :
Imbiber un disque « Ox » commercialisé avec une goutte d’eau distillée ou d’eau
physiologique stérile, puis prélever une partie de la colonie à étudier à l’aide d’une pipette Pasteur
boutonnée stérile et l’étaler sur le disque. Une coloration violet foncée, apparaît immédiatement ou en
quelques secondes : Test oxydase
+ .
Figure 15 : Disque « Ox » qui sert à la détermination de l’oxydase des bactéries.
e. Identification par la galerie API :
La galerie API est un système standardisé pour l’identification des bactéries ; elle est
composée d’un nombre variable de microtubes (10 ou 20 le plus souvent) contenant des substrats
déshydratés qui permettent de réaliser des tests biochimiques.
 Mode opératoire :
 Préparation de la galerie :
o mettre de l’eau distillée sur le fond de la boîte (partie alvéolée), toutes les alvéoles doivent être
rempli. Eliminer l’excès d’eau en renversant la boîte au dessus de l’évier.
o Placer la galerie sur le fond de la boîte, elle doit être manipulée avec la pince.
o Recouvrir la boîte avec son couvercle.
o Inscrire nom, référence souche, date et température d’incubation sur la languette latérale de la
boîte.
 Préparation de l’inoculum :
- Réaliser une suspension de la souche à étudier. La suspension doit avoir une densité suffisante
comme il est indiqué ci-dessous :
Oxydase
+
Oxydase
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