Chapitre 2
Matériels & Méthodes
74
2.5.2.7.7. Dénombrement des staphylocoques
Parmi les staphylocoques, c’est le Staphylococcus aureus qui est recherché et dénombré
dans notre étude. C’est une bactérie de la famille des Micrococcaceae de forme sphérique
(coque), de 0,8 µm à 1,0 µm de diamètre. Ces coques à Gram positif se présentent
généralement en grappes, par paires ou en cellules individuelles compte tenu de l’âge de la
culture. C’est une bactérie non mobile, asporulée et aérobie facultatif possédant une catalase.
S. aureus est un microorganisme pathogène dont on connaît au moins deux types
de manifestations cliniques chez l’homme. Les staphylocoques sont d’abord souvent mis en
cause dans les cas de toxi-infections alimentaires où il y a production d’une entérotoxine
thermorésistante responsable de gastro-entérites. Ils sont également responsables d’infections
rhinopharyngées et cutanées qui sont de loin prédominantes par rapport aux infections gastrointestinales.
Les staphylocoques trouvés dans l’eau proviennent principalement de la peau, de la
bouche, du nez et de la gorge des baigneurs et occasionnellement d’une pollution fécale. Les
staphylocoques pathogènes (S. aureus) produisent plusieurs types d’enzymes qui participent
à l’envahissement d’un hôte. Ces enzymes sont : la coagulase, la leucocidine, les
hémolysines, la phosphatase et la désoxyribonucléase (Dnase). De plus, les staphylocoques
sont parmi les organismes asporulés les plus difficiles à éliminer.
L’origine de S. aureus, sa pathogénicité, son pouvoir d’agression, sa résistance et
les facteurs environnementaux sont autant de facteurs qui démontrent l’importance de
confirmer son absence dans les eaux. L’ensemble de ces considérations en font le
microorganisme indicateur de choix pour les eaux à vocation récréative et les piscines.
A- Principe :
Pour les S. aureus, il s’agit d’incuber la membrane filtrante pendant 48h à 37°C sur
la gélose Baird-Parker. Dans ces à conditions, les S. aureus forment des colonies de
1,0 mm à 1,5 mm, convexes, noires (par réduction du tellurite) et brillantes avec une zone
claire dans la gélose sous la colonie. Il peut arriver qu’une zone opaque se forme à
l’intérieur de la zone claire. S. aureus produit normalement une zone claire par lipolyse
(lécithinase ou lipase) ou protéolyse et une zone opaque à cause de son système
enzymatique. De plus, S. aureus produit une réaction positive à l’épreuve de la
Désoxribonucléase (Dnase), la coagulase et la catalase.
B- Mode opératoire :
Après filtration d’un volume de 100ml d'échantillon, la membrane filtrante quadrillée
est déposée sur le milieu de Baird-Parker et incubée à 37°C pendant 48h. Il est possible
d’utiliser la gélose Chapman à la place du milieu de Baird-Parker, la lecture sera donc
différente comme illustré sur la figure.
Sur Baird-Parker, elle se caractérise par la formation de colonies noires, brillantes
convexes, entourées d’un halo d’éclaircissement.
Sur Chapman Staphylococcus aureus se présente sous forme de colonies de taille
moyenne, lisses, brillantes, pigmentées en jaune.
Matériels & Méthodes
74
2.5.2.7.7. Dénombrement des staphylocoques
Parmi les staphylocoques, c’est le Staphylococcus aureus qui est recherché et dénombré
dans notre étude. C’est une bactérie de la famille des Micrococcaceae de forme sphérique
(coque), de 0,8 µm à 1,0 µm de diamètre. Ces coques à Gram positif se présentent
généralement en grappes, par paires ou en cellules individuelles compte tenu de l’âge de la
culture. C’est une bactérie non mobile, asporulée et aérobie facultatif possédant une catalase.
S. aureus est un microorganisme pathogène dont on connaît au moins deux types
de manifestations cliniques chez l’homme. Les staphylocoques sont d’abord souvent mis en
cause dans les cas de toxi-infections alimentaires où il y a production d’une entérotoxine
thermorésistante responsable de gastro-entérites. Ils sont également responsables d’infections
rhinopharyngées et cutanées qui sont de loin prédominantes par rapport aux infections gastrointestinales.
Les staphylocoques trouvés dans l’eau proviennent principalement de la peau, de la
bouche, du nez et de la gorge des baigneurs et occasionnellement d’une pollution fécale. Les
staphylocoques pathogènes (S. aureus) produisent plusieurs types d’enzymes qui participent
à l’envahissement d’un hôte. Ces enzymes sont : la coagulase, la leucocidine, les
hémolysines, la phosphatase et la désoxyribonucléase (Dnase). De plus, les staphylocoques
sont parmi les organismes asporulés les plus difficiles à éliminer.
L’origine de S. aureus, sa pathogénicité, son pouvoir d’agression, sa résistance et
les facteurs environnementaux sont autant de facteurs qui démontrent l’importance de
confirmer son absence dans les eaux. L’ensemble de ces considérations en font le
microorganisme indicateur de choix pour les eaux à vocation récréative et les piscines.
A- Principe :
Pour les S. aureus, il s’agit d’incuber la membrane filtrante pendant 48h à 37°C sur
la gélose Baird-Parker. Dans ces à conditions, les S. aureus forment des colonies de
1,0 mm à 1,5 mm, convexes, noires (par réduction du tellurite) et brillantes avec une zone
claire dans la gélose sous la colonie. Il peut arriver qu’une zone opaque se forme à
l’intérieur de la zone claire. S. aureus produit normalement une zone claire par lipolyse
(lécithinase ou lipase) ou protéolyse et une zone opaque à cause de son système
enzymatique. De plus, S. aureus produit une réaction positive à l’épreuve de la
Désoxribonucléase (Dnase), la coagulase et la catalase.
B- Mode opératoire :
Après filtration d’un volume de 100ml d'échantillon, la membrane filtrante quadrillée
est déposée sur le milieu de Baird-Parker et incubée à 37°C pendant 48h. Il est possible
d’utiliser la gélose Chapman à la place du milieu de Baird-Parker, la lecture sera donc
différente comme illustré sur la figure.
Sur Baird-Parker, elle se caractérise par la formation de colonies noires, brillantes
convexes, entourées d’un halo d’éclaircissement.
Sur Chapman Staphylococcus aureus se présente sous forme de colonies de taille
moyenne, lisses, brillantes, pigmentées en jaune.