Chapitre 3
Matériels et méthodes
40
Tableau 1: Concentrations des différents standards préparés à partir de la solution
mère
Les fioles contenant les solutions standards sont placées dans un bac à ultrasons pendant deux
minutes dans le but de faire dissoudre le chrysène dans de l’hexane.
Le blanc de procédure
Le blanc analytique provient impérativement des réactifs utilisés, en particulier des
solvants. Pour le déterminer, on prend le même volume de solvant (n-hexane) que l’on a utilisé
pour l’extraction d’un échantillon et on lui fait subir exactement le même traitement (à partir
de l’étape de purification sur florisil). Dans ce cas, une purification et un fractionnement à
blanc sont réalisés.
2.3.5 Mesure des intensités de fluorescence
Les concentrations des hydrocarbures poly aromatiques sont déterminées à partir de
courbe étalon. Les conditions opératoires à la lecture des intensités de fluorescence (IF) sont
les suivantes :
- L’analyse de l’échantillon nécessite une longueur d’onde d’excitation 310 nm.
-L’émission de fluorescence est mesurée entre 310 et 500nm pour des longueurs d’ondes
d’émission fixées à 360 nm, 380nm et 410 nm avec un pic d’absorption maximale à 360 nm
pour les hydrocarbures aromatiques polynucléaires.
-L’ouverture des fentes d’excitation et d’émission est respectivement égale à 2 nm et 5 nm.
L’intensité de fluorescence (IF) est proportionnelle à la concentration [C] de l’échantillon dans
la gamme étalon de réponse linéaire du spectrofluorimètre déterminée par la courbe
d’étalonnage.
Elle permet d’établir le tracé d’une droite d’étalonnage pour chaque longueur d’onde
d’émission =360 nm, =380nm, = 410nm à partir des données de lecture correspondant aux
3 longueurs d’onde précisées.
Les droites d’étalonnage ont la forme suivante :
IF = a C + b ………………………………………………… (3.5)
IF : intensité de fluorescence en unité arbitraire U.A
C : concentration en hydrocarbures poly aromatiques HPA (en µg/ml)
a : pente de la droite
b : ordonnée à l’origine.
Matériels et méthodes
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Tableau 1: Concentrations des différents standards préparés à partir de la solution
mère
Les fioles contenant les solutions standards sont placées dans un bac à ultrasons pendant deux
minutes dans le but de faire dissoudre le chrysène dans de l’hexane.
Le blanc de procédure
Le blanc analytique provient impérativement des réactifs utilisés, en particulier des
solvants. Pour le déterminer, on prend le même volume de solvant (n-hexane) que l’on a utilisé
pour l’extraction d’un échantillon et on lui fait subir exactement le même traitement (à partir
de l’étape de purification sur florisil). Dans ce cas, une purification et un fractionnement à
blanc sont réalisés.
2.3.5 Mesure des intensités de fluorescence
Les concentrations des hydrocarbures poly aromatiques sont déterminées à partir de
courbe étalon. Les conditions opératoires à la lecture des intensités de fluorescence (IF) sont
les suivantes :
- L’analyse de l’échantillon nécessite une longueur d’onde d’excitation 310 nm.
-L’émission de fluorescence est mesurée entre 310 et 500nm pour des longueurs d’ondes
d’émission fixées à 360 nm, 380nm et 410 nm avec un pic d’absorption maximale à 360 nm
pour les hydrocarbures aromatiques polynucléaires.
-L’ouverture des fentes d’excitation et d’émission est respectivement égale à 2 nm et 5 nm.
L’intensité de fluorescence (IF) est proportionnelle à la concentration [C] de l’échantillon dans
la gamme étalon de réponse linéaire du spectrofluorimètre déterminée par la courbe
d’étalonnage.
Elle permet d’établir le tracé d’une droite d’étalonnage pour chaque longueur d’onde
d’émission =360 nm, =380nm, = 410nm à partir des données de lecture correspondant aux
3 longueurs d’onde précisées.
Les droites d’étalonnage ont la forme suivante :
IF = a C + b ………………………………………………… (3.5)
IF : intensité de fluorescence en unité arbitraire U.A
C : concentration en hydrocarbures poly aromatiques HPA (en µg/ml)
a : pente de la droite
b : ordonnée à l’origine.