Suivi des paramètres majeurs de la pollution des eaux de la baie de Bou-Ismail
Annexes
88
Solution d'acide chlorhydrique 0,3 mol/1
Diluer 40 fois de l'acide chlorhydrique concentré (12 mol/1) dans de l'eau déminéralisée : 2,5
ml d'acide pour 100 ml de solution.
Mode opératoire
1- La filtration :
La filtration des échantillons de chlorophylle par aspiration sous vide doit être réalisée le plus
rapidement possible après le prélèvement (quelques heures).
Les filtres utilisés sont de type Whatman GF/F en fibre de verre de 0,7µm.
Utiliser des pinces à bouts plats et bords biseautés pour manipuler les filtres.
L’utilisation du carbonate de magnésium í µí±í µí±í µí°¶í µí± 3 est déconseillée car il adsorbe certains
pigments.
Après filtration, récupérer les filtres et les enrober dans du papier aluminium numérotés.
Mettre les filtres au congélateur et à l’abri de la lumière si l’extraction ne se fait pas
immédiatement.
Pour éviter les chocs osmotiques, récupérer l’eau de mer filtrée après la filtration d’un
échantillon pour rincer le dispositif de filtration.
2- L’extraction :
-Placer, dans des tubes à centrifuger conditionnés auparavant, les filtres, et ajouter 10ml
d’acétone.
-Déchiqueter le filtre à l’aide d’une baguette ou un tube en verre, puis boucher et agiter pour
disperser les fibres.
-Envelopper les tubes à centrifuger de papier aluminium et laisser l’extraction acétonique se
poursuivre toute une nuit au réfrigérateur.
-La même procédure est réalisée pour un filtre vierge du même type que celui utilisé pour la
chlorophylle. Ce filtre servira pour la correction des résultats trouvés.
3- La centrifugation:
Une fois l’extraction terminée, centrifugé l’extrait dans une centrifugeuse comme suit :
-Sortir les tubes du réfrigérateur et les agiter.
-Vérifier que l’équilibre entre le poids des tubes est établi avant de placer les tubes dans la
centrifugeuse.
-Centrifuger les tubes durant une minute à 3500 tr par minute puis les sortir de la
centrifugeuse et faire tomber les fibres de verres qui adhèrent à la paroi au-dessus de la
surface du solvant par un léger mouvement d’agitation.
-Centrifuger à nouveau pendant 5mn à 3500 tr par minute.
-Transférer le surnageant de centrifugation dans une cuve de mesure, en veillant à ne pas
prendre de fibres.
Annexes
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Solution d'acide chlorhydrique 0,3 mol/1
Diluer 40 fois de l'acide chlorhydrique concentré (12 mol/1) dans de l'eau déminéralisée : 2,5
ml d'acide pour 100 ml de solution.
Mode opératoire
1- La filtration :
La filtration des échantillons de chlorophylle par aspiration sous vide doit être réalisée le plus
rapidement possible après le prélèvement (quelques heures).
Les filtres utilisés sont de type Whatman GF/F en fibre de verre de 0,7µm.
Utiliser des pinces à bouts plats et bords biseautés pour manipuler les filtres.
L’utilisation du carbonate de magnésium í µí±í µí±í µí°¶í µí± 3 est déconseillée car il adsorbe certains
pigments.
Après filtration, récupérer les filtres et les enrober dans du papier aluminium numérotés.
Mettre les filtres au congélateur et à l’abri de la lumière si l’extraction ne se fait pas
immédiatement.
Pour éviter les chocs osmotiques, récupérer l’eau de mer filtrée après la filtration d’un
échantillon pour rincer le dispositif de filtration.
2- L’extraction :
-Placer, dans des tubes à centrifuger conditionnés auparavant, les filtres, et ajouter 10ml
d’acétone.
-Déchiqueter le filtre à l’aide d’une baguette ou un tube en verre, puis boucher et agiter pour
disperser les fibres.
-Envelopper les tubes à centrifuger de papier aluminium et laisser l’extraction acétonique se
poursuivre toute une nuit au réfrigérateur.
-La même procédure est réalisée pour un filtre vierge du même type que celui utilisé pour la
chlorophylle. Ce filtre servira pour la correction des résultats trouvés.
3- La centrifugation:
Une fois l’extraction terminée, centrifugé l’extrait dans une centrifugeuse comme suit :
-Sortir les tubes du réfrigérateur et les agiter.
-Vérifier que l’équilibre entre le poids des tubes est établi avant de placer les tubes dans la
centrifugeuse.
-Centrifuger les tubes durant une minute à 3500 tr par minute puis les sortir de la
centrifugeuse et faire tomber les fibres de verres qui adhèrent à la paroi au-dessus de la
surface du solvant par un léger mouvement d’agitation.
-Centrifuger à nouveau pendant 5mn à 3500 tr par minute.
-Transférer le surnageant de centrifugation dans une cuve de mesure, en veillant à ne pas
prendre de fibres.